Domateslerde Bakteriyel Direncin Taranması için Fide Taşkın Testi

Özet

Kaynak: Hassan, J. A. ve diğerleri. Pseudomonas syringae pv'ye Direncin Yüksek Verimli Tanımlanması. Fide Taşkın Tahlili kullanılarak Domateste Domates. J. Vis. Uzm. (2020).

Bu video, bakteri süspansiyonu ile aşılanmış on günlük fideler kullanılarak farklı domates türlerinde bakteri direncini taramak için bir yöntem göstermektedir. Bakterilerin stomaları nasıl istila ettiğini, bitki bağışıklığını baskılamak için efektör proteinleri nasıl ilettiğini ve bitki tepkilerinin duyarlı ve dirençli suşlar arasında nasıl farklılık gösterdiğini açıklar. Sonuç, dirençli bitkilerin sağlıklı kaldığı ve duyarlı bitkilerin doku hasarı gösterdiği gözle görülür büyüme farklılıkları gözlemlenerek değerlendirilir.

Protokol

1. Domates fidesi sel yöntemi

1. 10 günlük fidelerin bulunduğu tabakları büyüme odasından çıkarın ve tabakları su baskınına hazırlamak için biyogüvenlik kabinine koyun.
2. Cerrahi bandı iki plakadan çıkarın.
3. 3 dakikalık bir zamanlayıcı ayarlayın. P. syringae pv'nin son aşısının 6 mL'sini ölçün. domates (Pst) (Pst19 OD₆₀₀ = 0.0075 veya PstDC3000 OD₆₀₀ = 0.005) ve 10 günlük fidelerle her tabağa 6 mL aşı aktarın.
4. Fideleri steril bir pipet ucuyla yavaşça aşının içine doğru itin. Zamanlayıcıyı başlatın.
5. Her elinizde birer tabak tutun. Aşı biriktirmek için plakanın önünü aşağı doğru eğin ve esas olarak fidelerin kotiledonlarını ve yapraklarını suya batırın.
6. Yan yana 5-7 kez çalkalayın ve ardından kökleri ve tüm plakayı kaplamak için plakaları geriye doğru eğin.
7. Kotiledonları ve yaprakları suya batırmak için plakaları tekrar aşağı doğru eğin ve toplam 3 dakika tekrarlayın.
8. İnokulumu plakalardan dökün, plakaları düz bir yüzeye koyun ve ardından kalan aşıyı ikinci kez dökün.
9. Plakaları cerrahi bantla yeniden sarın ve kalan plakalar için 1.2–1.8 arasındaki adımları tekrarlayın.
10. Tüm plakalar su bastıktan sonra plakaları büyüme odasında yeniden inkübe edin.

PstDC3000 için 7-10 gün veya Pst19 için 10-14 gün sonra fenotip.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Biyogüvenlik kabini, sınıf II tip A2
MARKA Tek Kullanımlık Plastik Küvetler, Polistiren	VWR Uluslararası	47744-642
Şönil Kraft Düz Ahşap Kürdanlar	VWR Uluslararası	500029-808
Cam Alkol Yakıcı Fitili	Fisher Bilimsel	S41898A / Hayır. W-125 Serisi
Cam Alkol Brülörleri	Fisher Bilimsel	S41898 / No. BO125
Gliserol ACS reaktifi	VWR Uluslararası	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ Hassas Görev Silecekleri	Fisher Bilimsel	06-666-A
Magnezyum klorür, ACS sınıfı	VWR Uluslararası	97061-356
Magnezyum sülfat heptahidrat, ACS sınıfı	VWR Uluslararası	97062-130
Mikrosantrifüj tüpleri, 1,5 mL
Mikrosantrifüj tüpleri, 2,2 mL
Murashige & Skoog, Bazal Tuzlar	Keson Laboratuvarları, Inc.	MSP01-50LT
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipet 20-200uL	Yağmur	L8-200XLS
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipet 2-20uL	Yağmur	L8-20XLS
Polistiren 100mm x 25mm steril petri kabı	VWR Uluslararası	89107-632
Polistiren 150mm x 15mm steril petri kabı	Fisher Bilimsel	FB08-757-14
Polistiren 150x15mm steril petri kabı	Fisher Bilimsel	08-757-148
İpuçları LTS 20 μL 960/10 GPS-L10	Yağmur	17005091
Uçlar LTS 250 μL 960/10 GPS-L250	Yağmur	17005093