Antibiyotik İlaç Direncini İncelemek için Mikroakışkan Çip Üzerinde Bakteri Üremesi

Özet

Kaynak: Liu, P.C., ve diğerleri. Antibiyotik ilaç seçimi altında bakterilerin adaptif evrimi için düşük maliyetli, otomatik bir morbidostat tasarımı ve kullanımı. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, trimetoprim antibiyotik stresi altında vahşi tip ve trimetoprim dirençli E. coli suşlarının büyümesini ve morfolojisini görselleştirmek ve karşılaştırmak için mikroakışkan bir çipin kullanımını göstermektedir.

Protokol

1. Çip Üzerinde Büyüme Deneyi

1. Mikroakışkan cihaza yüklemeden önce, 1 saat boyunca deiyonize su ve 1 saat boyunca M9 ortamı ile yıkayın.
2. Günlük donmuş numuneyi oda sıcaklığında 5 dakika çözdürün ve yeni bir test tüpünü taze M9 ortamıyla aşılayın. Numuneyi gece boyunca 37 °C'de bir çalkalayıcı inkübatöre yerleştirin.
3. Mikrobiyal numuneyi M9 ortamı ile 10 kat seyreltin ve mikrobiyal numune kabını 5 psi'de basınçlandırarak mikroakışkan cihaza yükleyin. Daha sonra ilaç ortamı kabını 5 psi'de basınçlandırarak trimetoprim (TMP) ilaç ortamını çipe yükleyin. Mikroakışkan çip üzerindeki iki odacık arasındaki mikromekanik valfi 15 dakika çalıştırarak mikrop ve ilaç arasındaki karışımı gerçekleştirin.
4. Mikroakışkan çipi, ters çevrilmiş mikroskop üzerine monte edilmiş mikroskop inkübatörüne yerleştirin. Ters çevrilmiş mikroskop üzerine monte edilmiş CCD kamera ile 8 saat boyunca her saat büyüme odasındaki hücre görüntüsünü elde edin.
5. Hücre görüntü verileri üzerinde bir eşik algoritması aracılığıyla hücre numaralarını hesaplamak için özel program komut dosyasını kullanın. Hücre sayısı verilerinin tipik olarak üç mikroakışkan oda üzerinden ortalamasının alındığına dikkat edin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ters mikroskop	Leica Mikrosistemleri	Leica DMI-LED	mikroakışkan ölçüm için kullanılır X40 objektif NA=0.55 kullanın
Mikroskop İnkübatörü	Canlı Hücre Enstrümanı	CU-109 Serisi	Mikroakışkan ölçüm için kullanılır
Solenoid valfler	Pnömadinin	S10MM-31-12-3	Normalde açık 1,3 Watt 12 Vdc
USB arayüz kartı	Hobi Mühendisliği	USBIO24-R Dijital G/Ç Modülü	mikroakışkan ölçümü için
Hava kompresörü	Rocker Bilimsel	ROCKER 440	Mikroakışkanlar için basınç kaynağı Basınç 80 psi
1/8" dikenli erkek luer-lock bağlantı parçaları	ValuePlastics.com	MTLL230-1	Mikroakışkan kontrol için kullanılır
1/8" dikenden 10-32 dişli bağlantı noktasına	ValuePlastics.com	B-1	Mikroakışkan kontrol için kullanılır
10-32 dişli bağlantı noktasına dişi luer-lock bağlantı parçaları	ValuePlastics.com	KFTL-1	Mikroakışkan kontrol için kullanılır
NPN darlington transistör 500mA, 40V (2N6427)	DigiKey.com	2N6427GOS-ND	Mikroakışkan kontrol için kullanılır
10kOhm, karbon film direnci, 0.25W	DigiKey.com	P10KBACT-ND	Mikroakışkan kontrol için kullanılır
Tantal kapasitör, 10 uF, 25 V, %10	DigiKey.com	478-1841-ND	Mikroakışkan kontrol için kullanılır
Andor CCD kamera	Andor	Zyla 4.2 Artı SCMOS	Çip üzerinde mikroakışkan görüntüleme için kullanılır
Trimetoprim	Sigma
Difco M9 minimum tuz 5x	BD		Orta