Sporosarcina pasteurii ile Mikrobiyolojik Olarak İndüklenen Kalsit Çökeltmesi

Özet

Kaynak: Bhaduri, S., ve diğerleri, Sporosarcina pasteurii'nin aracılık ettiği Mikrobiyolojik Olarak İndüklenen Kalsit Çökelmesi. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, üreaz aktivitesini tetiklemek için Sporosarcina pasteurii'yi üre ve kalsiyum klorür ile zenginleştirme yöntemini gösterir ve Mikrobiyolojik Olarak İndüklenen Kalsit Çökeltme veya MICP yoluyla görünür kalsit kristallerinin oluşumuna yol açar.

Protokol

1. Yağışı Hızlandırmak için Besin Zenginleştirme Protokolü

1. Hazırlanan kültür sıvısının 9 ml'sini (hücreler + ortam), her biri 10 ml hacimli birkaç sterilize santrifüj tüpüne aktarın.
2. Taze ortamda aşağıdaki konsantrasyonlarda dört bileşenden oluşan 100 ml'lik bir harici zenginleştirme stok çözeltisi hazırlayın: Üre: 2 g/L, Amonyum klorür: 1 g/L, Sodyum bikarbonat: 212 mg/L, Kalsiyum klorür: 280 mg/L. Analitik bir terazi kullanarak tüm malzemeleri dikkatlice ölçün ve üre hariç hepsini bir beherde taze ortamla karıştırın ve otoklava yerleştirin (121 °C, 15 psi, 15 dak).
   1. Otoklavın ardından, gerekli miktarda üreyi (2 mg) 1 ml taze ortamla karıştırın ve zenginleştirme işlemini tamamlamak için 0,22 μm şırınga filtresi ile donatılmış bir şırıngadan geçirin.
   2. Hazırlanan kültür sıvısından 9 ml (hücre + ortam) içeren sterilize santrifüj tüplerine katkı maddeleri içeren bu zenginleştirme ortamından 1 ml ekleyin.
      NOT: Yüksek sıcaklıklarda bozunabilen üre, otoklavda sterilize edilemez. Bu nedenle, diğer bileşenler otoklavlandıktan sonra (121 °C, 15 psi, 15 dakika), 0,22 μm'lik bir şırınga filtresinden en son üre eklenir.
3. Mekanik bir vorteksleyici kullanarak her tüpü iyice vorteksleyin. Zenginleştirilmiş sıvıları (hücreler + ortam + katkı maddeleri) 30 °C'de çalkalanmayan bir inkübatöre yerleştirin. Çökelmenin başlaması için tüm üniteleri düzenli olarak izleyin. Bir ışık mikroskobu kullanarak, yağışın başlangıcı çıplak gözle tespit edildikten sonra mikroskobik gözlemlere başlayın. Bu genellikle deneylerin başlamasından 30 - 36 saat sonradır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Pyrex şişeleri	Fisher Bilimsel	S63268	Corning Erlenmeyer
Ölçüm silindiri	Cole-Parmer	CP08559GC	Cole-Parmer Sınıf A Mezun Silindir w/Cal Cert,TC; 1000 mL,1/Paket
Analitik terazi	OHAUS	AX124E Serisi	Reaktiflerin ağırlığını ölçmek için kullanılır
Otoklav	Brinkmann Hakkında	58619000
Otoklav bandı	VWR	52428864
Alüminyum folyo	Sigma-Aldrich	Z185140	Şişeyi Otoklava yerleştirmeden önce mühürlemek için kullanılır
Bakteri stoğu	Sedir Sokağı	11859	-80°C S. pasteurii stoğu, ATCC No. Cat'e karşı bahsediliyor. Hayır.
Mline tek kanallı mekanik pipetleyiciler, değişken hacimli	Biyohit	725010	VWR tarafından katalog numarası altında pazarlanmaktadır 14005976
Mikropipet ucu	Fisher Bilimsel	212772B	Agar plakalarını çizmek için kullanılır
Kuvöz	Ciltçi	80079098	Mikrobiyoloji İnkübatörü, BF Serisi
Sallanan inkübatör	VWR	14004300	VWR Signature Tezgah Üstü Çalkalama İnkübatörleri
Parafilm	Sigma-Aldrich	P7793	Agar plakalarını kapatmak için kullanılıyor
Üre	Sigma-Aldrich	U1250 Serisi	Besin ortamı için zenginleştirme
Sodyum bikarbonat	Sigma-Aldrich	S8875 Serisi	Besin ortamı için zenginleştirme
Kalsiyum klorür	Sigma-Aldrich	C1016 Serisi	Besin ortamı için zenginleştirme