$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Aletleri, Kültür Ortamlarını, Solüsyonları ve Petri Kaplarını Hazırlayın
1. Kürdanları steril tutmak için alüminyum folyo ile kaplanmış 50 mL'lik bir beherde otoklavlayın.
2. Kullanılacak tüm kuru ürünleri (uçlar, çubuklar, cam eşyalar vb.) otoklavda sterilize edin.
NOT: Dikkat! Kullanılan otoklav modeli için tüm güvenlik talimatlarına uyun. Otoklavlar patlama, buhardan kaynaklanan yanıklar ve sıcak yüzeyler, malzemeler ve ortamlarla temas riski taşır.
3. Kültür yetiştirmek için MS agarı (Mannitol Soya Unu (SFM)) hazırlayın.
1. 1 L'lik bir şişeye 5 gr soya unu ve 5 gr agar ekleyin.
2. 5 g mannitol'ü 250 mL musluk suyunda eritin ve soya unu ve agar içeren şişeye dağıtın.
3. Şişenin ve otoklavın açıklığına 121 °C, 15 psi'de en az 30 dakika boyunca bir köpük tapa ve folyo ekleyin.
DİKKAT: Bu ortam kolayca kaynar. Otoklavlanan MS agarın gerçek hacminin en az dört katını tutabilen bir şişe kullanın. Benzer güvenlik hususlarına sahip bir otoklav yerine standart bir düdüklü tencere kullanılabilir. Alternatif olarak, otoklava erişim mümkün değilse, ortamı ve malzemeleri sterilize etmek için bir mikrodalga fırın kullanılabilir. Lise öğretmenleri ayrıca otoklavlanmış malzemelere erişmek için yerel kolejler veya üniversitelerle işbirliği yapmak isteyebilir.
4. Medyayı işlemek için yeterince rahat olana kadar soğutun. Agar 50 °C'nin altındaki sıcaklıklarda katılaştığı için çok uzun süre soğutmamaya dikkat edin.
5. MS agarı şişeden steril Petri kaplarına, her Petri kabının tabanı yaklaşık yarısı dolana kadar (Petri kabı başına yaklaşık 25 mL ortam) dökün. Agar plakalarını kullanmadan önce katılaşmasını bekleyin. Agar plakalarını ihtiyaç duyulana kadar oda sıcaklığında plastik bir torba içinde saklayın.
NOT: Agar plakaları, özellikle ortamda antibiyotik gerekiyorsa, buzdolabında da saklanabilir.
2. Streptomyces'i Yayılma için Plakalara Çizin
1. Streak Streptomyces , kadran çizgi yöntemi gibi standart bir yöntem kullanarak MS agar plakalarına tek kolonilere suşlanır.
NOT: Bir aşılama halkası veya steril kürdan kullanılabilir. İsteğe bağlı: Streptomyces türleri için R2YE ve minimal ortam gibi diğer ortamlar yaygın olarak kullanılır.
2. Plakaları 30 °C'de inkübe edin.
3. Her 4-6 günde bir tek bir koloni seçerek plakaları yeniden çizin. Koloniler yaşlandıkça rastgele mutasyona yatkın hale gelirler.
3. Görsel Görünümü Karşılaştırın ve Kaydedin
1. Adım 2'deki gibi tüm suşları çizdikten sonra, vahşi tip ana suşla karşılaştırıldığında her mutant için koloni morfolojisini not edin. Yeni Streptomyces türlerini karakterize ederken, yeni izolatı S. coelicolor veya S. venezuelae gibi iyi çalışılmış bir türün izolatıyla karşılaştırın. Temel şekil, koloni yüzeyi (bulanık, kel, buruşuk vb.), opaklık, yükseklik ve pigmentasyon gibi özelliklere (Şekil 1) dikkat edin (bitkisel miselyum, hava miselyumu ve/veya çevreleyen ortam arasında ayrım yapın).
2. Bir MS agar plakasını etiketleyin ve kama desenlerinde vahşi tip ve mutant suşları çizin (Şekil 1). Çapraz kontaminasyonu önlemek için hiçbir suşun başka bir suşa temas etmemesine dikkat edin. Suşların plaka üzerine çizildiği tarih ve saati not edin. Plakaları 30 °C'de inkübe edin.
3. Arka planı homojenleştirmek için yetiştirilen Petri kaplarını renkli veya beyaz kağıda yerleştirin. Kağıda suş adını, tarihini, inkübasyon sıcaklığını ve ilk plaka çizgisinden itibaren geçen süreyi yazın. Karışıklığı en aza indirmek için plakanın dijital bir fotoğrafını/resimlerini çekin ve ikinci bilgiler kağıt arka plan üzerine yazılmıştır.
NOT: Yazı, şekil hazırlığı için kullanılacaksa daha sonra fotoğraftan kırpılabilir.
