Redoks Boya Takviyeli Yarı Katı Ortam Kullanılarak Bakteri Hareketliliğinin Görselleştirilmesi

Özet

Kaynak: Chu, W. ve Zhuang, X. Bir Renk Reaksiyonuna Dayalı Bakteri Hareketliliğini Görselleştirme. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, hareketli ve hareketsiz suşları görsel olarak ayırt ederek bakteri hareketliliğini değerlendirmek için redoks boya bazlı yarı katı agar testini göstermektedir.

Protokol

Bakteri suşları

NOT: Su ortamından seksen suş izole edildi ve Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae ve Aeromonas hydrophila dahil olmak üzere otomatik bir bakteri tanımlama aracı kullanılarak tanımlandı (Malzeme Tablosuna bakınız) (Tablo 1). Staphylococcus aureus (Malzeme Tablosuna bakınız) negatif hareketsiz kontrol olarak kullanıldı; Pozitif kontrol suşları olarak Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Salmonella typhimurium (Malzeme Tablosuna bakınız) kullanıldı.

1. Hareketlilik analizi için kullanılacak test bakteri suşlarını tanımlayın.
2. Negatif hareketsiz kontrolleri ve hareketli pozitif kontrol suşlarını dahil edin.

TTC ile geliştirilmiş bakteri motilite gözlemi

1. Agar plakalarından tek test bakteri kolonileri seçin ve bunları aşılayıcı iğnelerle delerek TTC (2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür) ile yarı katı ortama aşılayın.
2. Sonuçları gözlemlemek için tüpleri inkübatörde 37 °C'de 24-48 saat kültürleyin.
3. Büyüme durumunu gözlemleyin: yalnızca delinme çizgisi kırmızıysa bakterileri hareketsiz (-) olarak nitelendirin. Kırmızı renk delinme çizgisi boyunca hafifçe dışa doğru yayılırsa bakterileri hareketli (+) olarak karakterize edin.

Tablo 1: Bakteriyel hareketliliğin karşılaştırılması.

Soy		%0.4 agarlı yarı katı ortam		%0.4 agar ve %0.005 TTC içeren yarı katı ortam
		24 saat	48 saat	24 saat	48 saat
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
E. koli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
E. koli (15)		12	14	13	14
Salmonella türleri (8)		7	8	8	8
A. hidrofil (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pnömoni (5)		-5	-5	-5	-5
Sayılar, pozitif suşların (+) ve negatif lekelerin (-) sayısını gösterir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Bacto Agar	Difco
Escherichia coli	ATCC	ATCC25922	Pozitif kontrol
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	Pozitif kontrol
Staphylococcus aureus	ATCC	ATCC25923	Negatif hareketsiz kontrol
Triptoz	OKSOID
TTC (2,3,5-Trifenil-tetrazolyum klorür)	Sigma	298-96-4
VITEK 2 otomatik mikrobiyal tanımlama sistemi	Bio Mérieux