Bakteriyel Spor Çimlenmesi Sırasında Korteks Bozulmasının Kolorimetrik Tespiti

Özet

Kaynak: Francis, M. B., ve diğerleri. Bakteriyel spor çimlenmesi sırasında korteks fragmanlarının tespiti. J. Vis. Uzm. (2016).

Bu video, zaman içinde indirgeyici şekerlerin salınımını ölçerek bakteri sporu çimlenmesi sırasında korteks bozulmasını tespit etmek için kolorimetrik bir yöntem göstermektedir. N-asetilglukozamin standartlarını ve zaman noktası örneklerini kullanan tahlil, korteks hidrolizinin derecesini gösteren mor bir kromojenik reaksiyon yoluyla şeker konsantrasyonunu ölçer.

Protokol

1. Renk Reaktifi

1. Numuneler buz üzerindeyken, renk reaktifini hazırlayın. 0.320 g p-dimetilaminobenzaldehit (DMAB; Ehrlich reaktifi) 1.9 ml buzlu asetik asit içinde.
   Not: Reaktif zamana, sıcaklığa ve ışığa duyarlıdır ve önceden yapılmamalıdır.
2. DMAB tamamen çözüldükten sonra 100 ul 10 N HCl ekleyin ve girdap ekleyin.
3. 5 ml buzlu asetik asit ve girdap ekleyin.

2. Kolorimetrik Reaksiyon

1. Soğutulmuş her korteks örneğinin 100 ul'unu yeni bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpüne aktarın.
2. Her numuneye 700 ul taze hazırlanmış renk çözeltisi ekleyin.
3. Numuneleri hemen 37 °C'lik bir su banyosuna aktarın ve TAM 20 dakika inkübe edin.
4. Her numunenin 200 μl'sini 96 oyuklu berrak bir plakaya aktarın.
5. Numuneleri bir plaka okuyucuda 585 nm'de ölçün. Numuneler sarı renkte başlamalıdır ve pozitif reaksiyon mora dönecektir. Korteks ne kadar fazlaysa, mor renk o kadar derin olur.

Malzemeler