Tek Hücreli Bakteri Büyümesinin Mikroakışkan Desenleme ve Floresan Tabanlı İzlenmesi

Abstract

Kaynak: Pioli, R., ve diğerleri, Sıralı Kılcallık Destekli Montaj Yoluyla Mikroorganizmaların ve Mikropartiküllerin Modellenmesi. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu video, karbonsuz bir süspansiyon ve kontrollü akış kullanarak mikroakışkan tuzaklarda tek floresan etiketli Escherichia coli (E. coli) hücrelerini yakalama yöntemini ve ardından mikrokolonilerin büyümesini ve floresan görüntülemesini tetiklemek için besin ilavesini göstermektedir.

Protocol

1. Bakteri desenlemesi

1. Deneyden bir gün önce, bir Escherichia coli popülasyonu büyütün (MG1655 prpsM-GFP suşu). Kültürü doğrudan donmuş stoktan aşılayın ve 37 °C'de bir çalkalayıcı inkübatörde lizojeni suyu (LB) ortamında 20 saat boyunca gece boyunca büyütün. Hücrelerin prpsM-GFP (yeşil floresan protein) plazmitini tutması için 50 μg/mL kanamisin ekleyin.
2. Deney gününde, başlamadan önce düzgün ve sabit bir sıcaklık sağlamak için kutu inkübatörü (Şekil 1A) deneyden birkaç saat önce 37 °C'ye ayarlayın. Ardından, şırınga pompasını ve ısıtılmış cam plakayı mikroskop aşamasına kurun (Şekil 1B, C), sıcaklığı kutu inküba....

Results

Şekil 1: Mikroakışkan bir kanalda sıralı kılcallık destekli montaj için platformun şeması. (A) Kutu inkübatörü. Kutu inkübatörü, mikroakışkan kanal içinde düzgün ve sabit bir sıcaklık (burada 30 °C) sağlar. (B) Sıvı süspansiyon yüklü şırınga.......

Materials