Tek Hücreli Bakteri Etkileşimlerinin Görselleştirilmesi

Özet

Kaynak: Yarringto, K. D., ve diğerleri. Tek Hücreli Türler Arası Bakteri Etkileşimlerinin Kinetik Görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu video, canlı hücre görüntüleme için bir agaroz pedi altında hareketli ve hareketsiz bakteriler kullanan bir ortak kültür sisteminin hazırlanmasını göstermektedir. Hareketli bakterilerin kimyasal cezbedicileri nasıl tespit ettiğini ve hareketsiz kolonileri nasıl istila ettiğini göstererek bakteri etkileşimlerini ortaya çıkarır.

Protokol

1. Bakteri Hücrelerinin ve Aşılama Pedlerinin Hazırlanması

1. Her bir alt kültürün optik yoğunluğunu, OD_600'ü ölçün ve 37 °C'ye önceden ısıtılmış M8T'de (Minimal Orta 8 + tripton) Pseudomonas aeruginosa'yı OD₆₀₀ = 0.03'e ve Staphylococcus aureus'u OD₆₀₀ = 0.10'a seyreltin. P . aeruginosa ve S. aureus'u 1:1 oranında karıştırın ve girdap yapın.
   NOT: Suşlar antibiyotik gerektiriyorsa, gece boyunca ve alt kültüre eklenebilirler, ancak ortak kültürdeki diğer türleri etkiliyorlarsa, görüntüleme için türler karıştırılırken eklenmemelidirler. Kullanılan her organizma/plazmit için plazmit stabilitesi ve antibiyotiklerin kokültürdeki tüm türler üzerindeki etkilerinin belirlenmesi gerekecektir.
2. Önceden ısıtılmış, steril 35 mm'lik bir cam lamel kabının tabanına eşit olarak 1 μL ortak kültür pipetleyin.
3. Steril cımbız kullanarak silikon kesiği kalıptan çıkarın.
4. Steril spatula kullanarak pedi tabaktan çıkarın.
   1. Steril bir Petri plaka kapağına bırakmak için kalıbı baş aşağı tutarken hafifçe bükülmüş spatulayı pedin kenarının altına kaydırın.
      NOT: Pedi dışarı doğru zorlamayın, aksi takdirde yırtılır. Pedin hangi tarafının altta olduğunu takip edin.
5. 90° açılı spatulayı pedin altına kaydırarak ve aşılanmış lamel üzerine yerleştirerek pedi bakteri hücrelerinin bulunduğu tabağa alt tarafı aşağı bakacak şekilde aktarın. Pedin lamel ile aynı hizada olmasını sağlamak için 90° açılı spatulayı kullanın ve hava kabarcıklarını hafifçe bastırın.
6. Nemli mendillerdeki fazla nemi alın ve pede temas etmediklerinden emin olarak tabağın kenarına yerleştirin. Numune artık görüntüleme için hazırdır.

Malzemeler