Monoklonal Bakteri Kültürü Hazırlama Tekniği

Özet

Kaynak: Lin, P., ve diğerleri. Bakteriyel mineral atılımı yoluyla sodyum tungstat ve sodyum molibdat mikrokapsüllerinin sentezlenmesi. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu video, bir agar plakası üzerinde seri seyreltme ve koloni izolasyonu yoluyla mineral üretimi için bir monoklonal bakteri kültürünün hazırlanmasını göstermektedir. Plakayı cam boncuklarla sallayarak, tek tek hücreler genetik olarak tekdüze koloniler oluşturmak üzere uzamsal olarak ayrılır ve bunlar daha sonra büyüme için sıvı ortama aktarılır. En yoğun monoklonal popülasyonu ve en büyük mineral çıkışı potansiyelini gösteren en yüksek bulanıklığa sahip kültür seçilir.

Protokol

1. Cam Boncukların Hazırlanması

1. 100 mL'lik bir laboratuvar şişesine 3 mm çapında 100 cam boncuk yerleştirin ve ardından sıkıca kapatın.
2. İçeriği 120 °C'de 10 dakika otoklavlayın.
3. Şişeyi oda sıcaklığına soğumaya bırakın, ardından biyogüvenlik kabinine yerleştirin.

2. Lizojeni Suyunun (LB) Hazırlanması

1. 8 g LB-Lennox et suyu tozunu 500 mL'lik bir laboratuvar şişesinde 400 mL su ile eritin.
2. İçeriği bir politetrafloroetilen (PTFE) manyetik karıştırma çubuğu ile 20 dakika karıştırın ve ardından sıkıca kapatın.
3. İçeriği 120 °C'de 10 dakika otoklavlayın.
4. Çözeltiyi oda sıcaklığına soğumaya bır....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Agar tabletleri ile LB (Lennox suyu)	Sigma-Aldrich	L7075 Serisi	Agarlı 50 mL et suyu için 1 tablet
LB (Lennox suyu)	Sigma-Aldrich	L3022-1KG	LB (Lennox) tozu 1 kg
Dekstroz susuz	Nihon Shiyaku Reaktifi	PL 78695 Serisi	glikoz
50 mL santrifüj tüpü	Doğan	14-432-22
15 mL santrifüj tüpü	Doğan	14-959-53A
Laboratuvar şişesi 100 mL	Duran	21 801 24 5
Laboratuvar şişesi 500 mL	Duran	21 801 44 5
Paslanmaz çelik spatula	Kimya camı	CG-1981-10
PTFE Tek Kullanımlık Karıştırma Çubukları	Balıkçı	S68066 Serisi
Plastik Petri Kapları	Balıkçı	S33580A
Kuvöz	Müşteri yapımı	Özel yapım	40 °C'ye ısıtın veya 18 °C'ye soğutun
Biyogüvenlik kabini	Zong Yen co., LTD	ZYBH-420	Bakterilerle ilgili tüm işlemler burada yapılır
Otoklav	Tomin Medical Equipmenco, Ltd., Taipei Şehri, Tayvan, ROC	TM-329 Serisi	10 dakika boyunca 120 °C'ye ısıtın