Bu video, floresan prob etiketlemesini fikosiyanin otofloresan ve prob sinyalinin akış sitometrik analizi ile birleştirerek canlı ve ölü Microcystis aeruginosa hücrelerini ayırt etme yöntemini göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Microcystis aeruginosa'nın Akış Sitometrisi Kullanılarak Canlılık Analizi
602 görüntülenme
⸱
30 Ekim 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
1. Moleküler Prob Hücre Alımının Optimizasyonu
- M. aeruginosa kültürünün yarısını üstel bir aşamadan hasat edin ve onu 'canlı' bir kontrol olarak kullanın.
NOT: Yüksek yoğunluklu bir kültürden doğrudan üstel bir faza seyreltilen numuneler, ilk gecikme / indüksiyon fazından aşılanan kültürlere kıyasla ölü hücre döngüsü yoluyla optimizasyon sonuçlarını etkileyebilir. - Diğer yarısını %70 etanol, numuneleri 60 oC'de 1 saat ısıtma, paraformaldehit veya %4 formaldehit gibi yöntemler kullanarak 30 dakika boyunca 'ölü' kontrol olarak hazırlayın. Numunelerin mikro ortamındaki değişiklikleri kontrol edin (örn. pH).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Siyanobakteriler Medya | Sigma-Aldrich | C3061-500ML Serisi | BG-11 Tatlı su konsantre çözeltisi (x50 seyreltme) |
| Dekontaminasyon Sıvısı | BD Biyolojik Bilimler | 653155 | Çıkışlar hızlı veya 66 μl/dak akış hızında saniyede 12 olaydan fazla olduğunda 2 dakika çalıştırın. Ardından 2 dakika kılıf H2O. |
| Akış Sitometresi | BD Biyolojik Bilimler | istek üzerine | BD Doğru C6 |
| SYTOX Yeşil | Yaşam Teknolojileri | S7020 Serisi | Nükleik asit boyası – DMSO'da 5 mM çözelti |
| SYTOX Turuncu | Yaşam Teknolojileri | S11368 | Nükleik asit boyası – DMSO'da 5 mM çözelti |
