Tiplendirilemeyen Haemophilus influenzae Kültürü

Özet

Kaynak: Venuprasad, K. ve ark., Hava Yolu Enflamasyonunu İncelemek İçin Fare Modellerinde Haemophilus influenzae'nin Trakeal İçi Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, tiplendirilemeyen Haemophilus influenzae'nin kültürlenmesini ve aşağı akış kolonizasyonu veya enfeksiyon çalışmaları için doz standardize edilmiş bir inokulumun hazırlanmasını göstermektedir.

Protokol

1. Tiplendirilemeyen Haemophilus influenzae'nin (NTHi) kültürlenmesi ve inokulumun hazırlanması

1. NTHi'yi bir çikolata agar tabağına koyun ve tabağı nemlendirilmiş bir CO₂ inkübatöründe gece boyunca 37 ° C'de ve% 5 CO_2'de baş aşağı tutun 2 . Ertesi gün, bakterileri beyin kalp infüzyon suyunda kültürleyin. Daha sonra 1 ml et suyunu steril 1,5 ml'lik bir tüpe ekleyin.
2. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 4.000 x g'da santrifüjleyin. Daha sonra süpernatanı atın ve peleti 1 ml steril 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde yeniden süspanse edin. Bu adımı bir kez tekrarlayın.
3. Yeniden süspanse edilmiş çözeltinin 100 ul'unu 900 ul 1x PBS'ye aktarın ve seyreltilmiş kültürün absorbansını bir spektrofotometrede 600 nm dalga boyunda ölçün.
4. Çikolata agar plakaları üzerinde 1:10 seri seyreltmeleri kültürleyerek ve gece boyunca 37 °C ve% 5 CO_2'de inkübe ederek aşının canlılığını ve koloni oluşturan birimlerini (CFU'lar) belirleyin.
5. Önceki adımda belirlenen canlılık ve CFU'lara bağlı olarak, aşıyı 20 x 10⁶ CFU / ml'lik bir nihai konsantrasyona ayarlayın.

Malzemeler