Isı stresli sıçanlarda Bacillus subtilis'in etkilerini değerlendirmek için histolojik ve hematolojik analizler

Özet

Kaynak: Sorokulova, I. ve diğerleri. Bacillus subtilis Strain ile sıçanlarda ısı stresi olumsuz etkilerinin önlenmesi. J. Vis. Exp. (2016)

Bu video, ısı stresine maruz kalan sıçanlarda Bacillus subtilis'in koruyucu etkilerini değerlendirmek için kullanılan histolojik ve kan mikroskopisi analizlerini sunmaktadır.

Protokol

1. Histolojik Analiz

1. Her deneysel sıçandan cerrahi işlemle ince bağırsak örnekleri alın. Örnekleri Bouin Fiksatifine sabitleyin, parafine gömülün, 6 μm kesitler hazırlayın ve standart prosedürlerle hematoksilin ve eosin ile boyama bölümleri yapın.
2. Her örnekte bağırsak villuslarının yüksekliğini ve toplam mukozal kalınlığını ölçmek için yüksek çözünürlüklü bir mikroskop sistemi kullanın (büyütme 100X). Her sıçandan 4 örnek analiz edin ve her örnekte en az yirmi ölçüm yapın. Mikrometrede sonuçları ekspres et.

2. Kanın Yüksek Çözünürlüklü Işık Mikroskopisi

1. Mikroskop sistemi ve canlı görüntüleri kaydetmek için video kamera ile bilgisayar için bir taban olarak titreşim izolasyon platformu kullanın. Test görüntülerini Richardson slaytı kullanarak kalibre edin.
2. Her fareden 7 μl taze alınan kanı cam slayt üzerine yerleştirin, kapak kağıdı, fotoğraf ve her örnekte 72 × 53,3^μm2 boyutlarında on görüntü karesini kaydedin (büyütme 1.700X).
3. Gerçek zamanlı yüksek çözünürlüklü doğrudan optik görüntüler sağlayan yazılım kullanarak veziküllerin konsantrasyonunu ölçmek. Her deneysel durum için en az 20 görüntü karesini inceleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Fosfat tamponlu tuzlu (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Bouin'in Fiksasyonu	Elektron Mikroskopi Bilimleri, Hatfield, PA, ABD	15990
Richardson test slaytı	Elektron Mikroskopi Bilimi, Hatfield, PA, ABD	80303
Sony DXC-33 Video kamera	Sony
Işık mikroskobu optik sistemi	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Image-Pro Plus yazılımı	Media Sibernetik, MD, ABD