$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Vibrio cholerae suşlarının Korunması ve Büyümesi
- Dondurulmuş Stok Kültürlerinin Hazırlanması ve Kullanımı
- 1,8 mL sıvı kültürü 2 dakika boyunca 2 dakika boyunca santrifüjle (≥8.600 x g) steril bir 2 mL mikrosantrifüj tüpünde pişirin, süpernatantı çıkarın ve hücre pelletini pipetle 900 μL taze Luria-Bertani (LB) çorbasına yeniden süsküyünüz.
- Kültüre 900 μL steril, %60 (v/v) gliserol ekleyin ve vortex ile karıştırın.
- Karışımı steril 2 mL'lik bir kriyojenik tüpe aktarın ve -80 °C'de süresiz olarak saklayın.
- Kullanmak için, LB agar plakalarında tek koloniler için steril aşılama döngüsü ve çizgi kullanarak az miktarda donmuş stok çıkarın. Kültürlerin tamamen erimesini önlemek için donmuş stoyu hemen kullandıktan sonra -80 °C'ye geri döndürün. Plakaları kapağı aşağı 12 ila 16 saat boyunca 37 °C'de kuluçka yapın.
- Sıvı ortamda gece boyunca kültürlerin büyümesi
- Tek koloniler için (bölüm 1.1.4'e göre) donmuş stoktan LB agar plakalarına çizgi. Plakaları kapağı aşağı 12 ila 16 saat boyunca 37 °C'de kuluçka yapın.
- 4 mL sıvı LB çorbasını, tek koloniyle steril bir koloniyle steril bir kültür tüpünde aşılayın; tek koloninin yüzeyine steril aplikatör çubuğu ile dokunup koloniyi sıvı suya aktarın.
- Bir shaker kuluçkada 225 devir (rpm) hızla, 37 °C'de 12 ila 16 saat boyunca inkübe yapın.