Vibrio cholerae'nin Biyotiplerini Ayırt Etmek İçin Voges-Proskauer Testi

Özet

Kaynak: Brumfield, K. D. ve diğerleri, Vibrio cholerae Klinik ve Çevresel İzolatlarının Biyotiplerini Korumak ve Ayırt Etmek İçin Laboratuvar Teknikleri. J. Vis. Exp. (2017).

Bu video, Vibrio cholerae'nin üç biyotipini ayırt etmek için yapılan Voges-Proskauer (VP) testini gösteriyor: klasik, vahşi tip El Tor ve El Tor varyantı. Her kültür, glikoz içeren bir ortama aşılanır, inkubasyon edilir ve asetoin varlığını tespit etmek için α-naftal ve potasyum hidroksit ile muamele edilir. Pembemsi-kırmızı renk, pozitif VP reaksiyonunu göstermek, yalnızca vahşi tip El Tor biyotipinde gözlemlenir ve bu da onu klasik ve varyant tiplerden ayırır.

Protokol

Voges-Proskauer (VP) testi

1. Gece boyunca sıvı LB çorbasında kültür(ler) hazırlayın.
2. 4 mL metil kırmızı Voges-Proskauer veya MR-VP çorbasını, önceden hazırlanmış gece kültüründen 10 μL'yi steril kültür tüpünde 4 mL MR-VP çorbasına pipetleyerek inkülyasyon yapın ve 225 rpm'de bir shaker inkübatörde 12 ila 16 saat boyunca 37 °C'de havalandırma ile inkübe yapın.
3. Steril kültür tüplerinde 1 mL MR-VP gece kültürüne sırasıyla %5 (w/v) α-naftal ve %50 μL 40 (w/v) KOH eklenin.
4. Kısa bir girdap yapın ve renk değişikliği oluşana kadar oda sıcaklığında 4 saate kadar bekletin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
MR-VP Bulbası	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
KOH	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-napthol	MP Biyomedikal	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189