Mikroplaka okuyucu kullanarak bakteri büyümesinin hassas ve yüksek verimli analizi

Abstract

Kaynak: Kurokawa, M. ve diğerleri. Bakteriyel Büyümenin Kesin, Yüksek Verimli Analizi. J. Vis. Exp. (2017)

Bu video, mikroplaka okuyucu kullanılarak bakteri büyümesinin yüksek verimli niceliklendirilmesini gösteriyor. Kültür hazırlığı, optik yoğunluk ölçümü ve büyüme dinamiklerinin analizi aşamalarını özetler.

Protocol

1. Büyümenin gerçek zamanlı kaydı
   1. Aşılanmış kültür örneklerinin 96 kuyu plakasındaki konumlarını göstermek için 96 kuyu plaka piktogramı (8 × 12 tablo) çizin. Tabloyu yazdırın ve deney için referans olarak kullanın.
      NOT: Mikroplakanın kenarlarında bulunan kuyular buharlaşma nedeniyle sadece boş ortam içermelidir.
   2. Sterilize edilmiş 96 kuyuyuk düz tabanlı mikroplaka, kapaklı bir mikroplaka, P-1000, 1000-μL pipet uçları, P-200, 200-μL pipet uçları, birkaç 1,5-mL mikrotüp, 8 çok kanallı pipet, sterilize edilmiş bir reaktif rezervuar, oda sıcaklığında M63 ve Escherichia coli gliserol stoklarını temiz bir tezgaha yerleştirin.
   3. Reaktif rezervuarına yaklaşık 25 mL M63 ekleyin. Bu rezervuar dipçiğini aşağıdaki tüm adımlar için kullanın.
   4. Seri seyreltme yapmak için mikrotüplere 900 μL M63 eklenir.
   5. Gliserol stokunu oda sıcaklığında çöz. Eritilmiş gliserol stokuna ve girdabına 900 μL M63 ekleyin. Bu, orijinal gliserol stokunun 10 kat seyrelmesine yol açar.
   6. 100 μL seyreltme 100 μL M63 ve girdap içeren başka bir mikrotübe aktarılır. Bu, 100 kat seyreltme ile sonuçlanır.
   7. 1.6. adımı istenen seyreltme sayısına ulaşana kadar tekrarlayın.
   8. Mikroplakanın kenarındaki kuyular 8 kanallı pipet (P-200) kullanılarak 200 μL M63 ile doldurulur.
      NOT: Bu kuyular boşluk olarak kullanılabilir.
   9. 1.4 - 1.7. adımlarda hazırlanmış her seyreltilmiş örnekten 200 μL'yi, referans tablosuna göre mikroplaka kuyruklarına yükleyin (adım 1.1). Sulandırılmış örnekleri yüklemeden önce girdabla doldurun ve aynı örneği plaka üzerinde farklı noktalarda birden fazla kuyuya yükleyin.
   10. 96 kuyruklu mikroplakayı plaka okuyucuya yerleştirin.
   11. "Görev Yöneticisi"nden "Şimdi Oku" seçeneğini aç ve programı seç. Ölçmeye başlamak için "OK" tuşuna tıklayın. Kaydı veri analizi için yeni bir deneysel dosya olarak kaydedin.

Materials