Strese Uyum Sağlamış Bakterilerin Tek Koloni Seçimi Yoluyla İzolasyonu

Özet

Kaynak: Jeong, H. ve diğerleri. Kemostat kullanarak mikroorganizmaların uyarlanabilir laboratuvar evrimi prosedürü. J. Vis. Exp. (2016).

Bu video, uzun süreli stres koşullarına maruz kalan bir kültürden strese uyum sağlamış bakterilerin seçici izolasyonu ve büyümesini göstermektedir. Kültür, stresör içeren agar üzerine örtülenir ve strestör ile sıvı ortamı aşılamak için tek bir koloni seçilir. Soğukkanlılık, büyümeyi izlemek ve strese uyum sağlamış bakterilerin başarılı izolasyonu doğrulamak için düzenli aralıklarla ölçülür.

Protokol

1. Ekipman Hazırlığı

1. Bir chemostat kavanozu (150-250 ml) veya bir giriş portu ve çıkış portu içeren bir Erlenmeyer şişesi (250 ml) alın. Portları silikon boru ile bağlayarak 10-100 ml/saat akış hızları sağlanır. İsteğe göre, bir hava menfzesi, bir hava çıkış portu ve sıcaklık kontrollü su giriş ve çıkış portları kullanın.
2. Chemostat kavanozuna uygun ve çaltlama ve sıcaklık kontrolü sağlayan bir cihaz edinin (veya döner sallama kuluçka makinesi kullanın).
3. Taze ortam sağlamak ve kültürü toplamak için iki peristaltik pompa alın.
4. Orta çıkış portu ve hava giriş portu içeren bir rezervuar kavanozu (10-20 L) edinin.
5. Sulandırma hızına uyg....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Mini-kemostat fermentörü	Biotron Inc.	-	özel siparişle üretilmiştir
Silikon boru	Cole-Parmer	Masterflex L/S 13	Boru boyutu, seyreltme oranına ve fermentör kavanozunun boyutuna bağlı olarak değiştirilebilir.
Rezervuar kavanozu	Bellco	Medya depolama şişesi	20 L
Kimyasal	Sigma-Aldrich	-	Reaktif derecesi
Glikoz	Sigma-Aldrich	G5767	ACS reaktifi
NH₄Cl	Sigma-Aldrich	A9434	moleküler biyoloji için, hücre kültürüne uygun olanlar, %99,5 ≥
NaCl	Sigma-Aldrich	746398	ACS reaktifi, %≥99%
Na₂HPO₄·2H₂O	Sigma-Aldrich	4272	98.5-101%
KH₂PO₄	Sigma-Aldrich	795488	ACS reaktifi, %≥99%
MgSO₄·7H₂O	Sigma-Aldrich	230391	ACS reaktifi, ≥98%
CaCl₂	Sigma-Aldrich	793639	ACS reaktifi, ≥96%
Tiamin·HCl	Sigma-Aldrich	T4625	Reaktif derecesi, ≥99%
Na₂succinate·6H₂O	Sigma-Aldrich	S2378	ReagentPlus, %99 ≥