Mikrofluidik Cihaz Kullanarak Bakteriyel Hareketliliğin Değerlendirilmesi

Abstract

Kaynak: Scheidweiler, D. ve diğerleri. Akışkan Cihazların Mikroskopi ve Akış Sitometrisi ile Birleştirilerek Gözenekli Ortamlarda Mikrobiyal Taşınımı Mekansal Ölçeklerde İncelemek. J. Vis. Exp. (2020).

Bu video, rastgele düzenlenmiş sütunlardan oluşan gözenekli bir matriks aracılığıyla bakteri hareketliliğini ölçmek için mikrofluidik bir cihazın kullanıldığını gösteriyor. Fluoresan etiketli bakteriler cihaza dahil edilir, gözenekli matriksin içinden gözlem kanalına ilerlerken mikroskopi ile görüntülenir ve analiz edilir ve bir atılım eğrisi (BTC) oluşturulur.

Protocol

1. Bakteriyel kültür koşulları

1. Laminar akış başlığı altında, yeşil floresan protein (GFP) etiketli Pseudomonas putida KT2440 (1 × 10^{7 mL-1}, -80 °C'de depolanan) gliserol stokundan 100 μL gliserol stoku kullanılarak 5 mL Luria-Bertani (LB) ortamı aşılanacaktır. Gece boyunca 250 rpm'de sallanırken 30 °C'de kuluçka yapın.
2. Ertesi gün, gece boyunca kullanılan kültürün 100 μL'sini 5 mL LB ortamında yeniden askıya alın ve aynı koşullarda 5 saat boyunca kuluçka (üstel faz) kullanın. 1 mL aliquot'u 2 mL'lik bir tüpe örnekleyin, oda sıcaklığında (~15 dakika) soğumaya izin verin ve santrifüjle (2300 x g 5 dakika) yapın.
3. ....

Results

Şekil 1: Gözenekli ortamda mikrobiyal taşımayı incelemek için akışkan cihazlar (A) Poli(metil metakrilat (PMMA)'dan frezedilen akışkan bir cihazın illüstrasyonu. Gözenekli matris, cihazın temel katmanına frezelenir ve kapak vidalarla kapatı.......

Materials