$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modelleriyle ilgili tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından incelenmiştir.
1. Intraperitoneal enjeksiyonla deneysel M. marinum enfeksiyonu
- Sulandırılmış bakteriyel çözeltinin 5 μL damlasını parafilm filmine pipet yapın ve damlayı 30 G'lik bir insülin iğnesine çekin.
- Deney için 5–8 aylık vahşi tip balıklar ve rag1−/−hu1999 mutant balıklar kullanın. Yetişkin zebrabalıkları tank suyunda %0,02 3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7,0) ile anestezi edin. Balığın ventral tarafını yukarı doğru, nemli köpüklü bir plastik üzerinde bir yarık haline getirin.
NOT: Rag-/- mutant balıklar somatik rekombinasyon geçirip fonksiyonel T ve B hücreleri üretemez. - İğneyi pelvik yüzgeçler arasına yaklaşık 45° açıyla enjekte edin. İğneyi yukarı doğru tutarak tüm açıklığın karın boşluğunun içinde olduğunu kontrol edin. Bakteri süspansiyonunu yavaşça enjekte edin ve iğneyi dikkatlice çıkarın.
NOT: Enjeksiyon sırasında kırmızı izleyici balıktan sızıyorsa, balığı deneyden dışlayın. - Enjeksiyondan hemen sonra, balıkları taze tank suyu olan bir geri kazanma tankına aktarın.
- Kullanılan bakteri aliquot'tan her 15 dakikada bir 7H10 plakalarında bakteri süspansiyon örnekleri alın ve bakteriyi 5 gün boyunca 29 °C'de kuluçkaya geçirin ve plakalardaki kolonileri sayarak enfeksiyon dozunu doğrulayın.
- Balıkların sağlığını düzenli olarak kontrol edin ve enfeksiyon belirtileri olan balıkları %0,02'nin üzerinde 3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7,0) konsantrasyonuyla ötanaziye yapın.
NOT: Yaklaşık olarak, 34 ± 15 CFU ile enfekte olan yetişkin zebra balıklarının %7'si ve 2029 ± 709 CFU ile enfekte olan zebra balıklarının %30'u 8 haftaya kadar semptomlar göstermiş olacaktır19. Belirtiler arasında anormal yüzme, dokunmaya tepki vermeme, nefes nefese, ödem veya gözlemlenebilir bir zayıflama olabilir. - Zebra balıklarını ortak standartlara göre bakıma tutun