Ortak kültürde Mikrobiyal Etkileşimleri Araştırmak İçin Vitro Bir Analiz

Özet

Kaynak: Temkin, M. I. ve diğerleri. Mikrobiyal etkileşimlerin araştırılması için yüksek verimli ortak kültür testleri. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, Corynebacterium propinquum ile Staphylococcus arasındaki mikrobiyal etkileşimleri bir ortak kültürde incelemek için in vitro testi sunmaktadır.

Protokol

1. Hedef Organizma Aşısı

NOT: Gece kuluçkasından sonra, kültürlerin bulanık olduğundan emin olun. Bazı bakteriyel kültürler kültür tüpünün alt kısmında flokulasyon yapabilir. Kültür tüplerini girdabla dağıtarak kümeleri dağıtın ve kültür bulanıklığını değerlendirin.

1. Hedef plakayı, boş 12 delikli plakanın her kuyusunu 1.8 mL Beyin-kalp infüzyon (BHI) suyu ve 200 μL hedef gece kültürü ile doldurarak hazırlayın.
   NOT: Hedef organizma, inhibisyon durumu ortak kültür etkileşim testi kullanılarak belirlenen organizmayı ifade eder. Bu deney için hedef organizmalar, insan burun yıkama örneklerinden izole edilen Staphylococcus türleridir.
2. Ambalajı açın ve hedef plakaya steril bir aşılama damgası yerleştirin. Kuyulardan kültürleri nazikçe karıştırın, kültürlerin komşu kuyuları karıştırmamasına dikkat edin.
3. Aşılama damgasını kaldırın ve her pulun ucunda seyreltilmiş hedef kültür damlası olduğundan emin olun.
4. Aşılama damgasını aşılanmamış bir biyoanaliz plakasına yerleştirerek monokültür kontrol plakası hazırlayın ve her kuyuyu bir kültür damlası aşılaması için damgayı nazikçe sallayın. Aşılama damgası çıkarıldıktan sonra, biyoanaliz plakasının kuyularında bir damla kültür görünür olmalıdır.
   1. Eğer herhangi bir kuyu dengesiz ortam seviyeleri nedeniyle aşılama damgası ile aşılanmamışsa, pipet kullanarak kuyunun sağ tarafına 3 μL gece boyunca seyreltilmiş kültür yerleştirin.
5. Yukarıda yapılan gibi biyoanaliz plakalarını aşılayın (bkz. adım 1.4.1), ancak damgayı uçların 12 kuyu plakanın sağ tarafıyla hizalayacağını belirtin. Kuyular aşılanırken damganın mevcut bakteri kolonisiyle temas etmediğinden emin olun.
6. Damgayı dikkatlice çıkarın ve hedef plakaya geri yerleştirin.
7. Her biyoanaliz plakası için aşılamayı tekrarlayın, tüm plakalar aşılanana kadar.
8. Biyoanaliz plakalarını uygun sıcaklıkta ters olarak 7 gün boyunca kuluçka edin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
12 delikli hücre kültür plakası, kapaklı steril	Greiner biyo-bir	665 180
Agar, bakteriyolojik	VWR	J637
Beyin Kalp İnfuzyon Suyu	Dot Scientific	DSB11000-5000