Patates Bitkilerinde Patates Virüsü X Tabanlı mikroRNA Susturma

Özet

Kaynak: Zhao, J., et al. Potato Virus X Tabanlı mikroRNA Susturma (VbMS) Patateste. J. Vis. Exp. (2020).

Bu video, virüs tabanlı mikroRNA susturma (VbMS) amacıyla, in vitro yetiştirilmiş patates bitkilerine Potato Virus X (PVX) tabanlı bir konstrükt iletmek için Agrobacterium tumefaciens kullanımını göstermektedir. Bu yöntem, bir hedef mikroRNA'nın sistemik olarak baskılanmasını sağlayarak araştırmacıların, gözlemlenebilir fenotipik değişiklikler aracılığıyla bu mikroRNA'nın bitki gelişimi üzerindeki rolünü incelemesine olanak tanır.

Protokol

1. Patates bitkilerinde PVX tabanlı VbMS analizi gerçekleştirin.

1. 4 haftalık in vitro patates bitkilerini toprağa dikin. Dikilen bitkiler 3–4 gün sonra VbMS analizine tabi tutulacaktır.
2. Patates bitkilerini PVX-STTM (Short Tandem Target Mimic) plazmitlerini içeren Agrobacterium ile inoküle edin.
   NOT: Patateste VbMS analizi için, Agrobacterium aracılı infiltrasyon ve kürdanla çizme yoluyla inokulasyon eş zamanlı olarak gerçekleştirilir.
   1. PVX-STTM vektörlerini içeren pozitif transformantları seçin ve 50 μg/mL kanamisin ve 50 μg/mL rifampisin içeren 50 mL sıvı LB'ye inoküle edin. OD

Sonuçlar

Şekil 1: Tetraploid patates çeşidi Katahdin'de miR165/16'nın VbMS'si. PVX vektör kontrolü veya PVX-STTM165/16 eksprese eden patates bitkilerinin (Katahdin) fenotipleri. Macenta oklar, yaprak damarlarında ektopik olarak oluşmuş yaprak yapılar.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Agrobacterium tumefaciens suşları: GV3101, GV260 veya EHA105.
Gübre: Peters Peat Lite Special 15-0-15 Dark Weather Feed	ICL Specialty Fertilizers, Summerville, SC 29483, ABD	G9260
MgCl2₂	ThermoFisher, Waltham, MA 02451, ABD	MFCD0149781
PVX VIGS vektörü: PVX-LIC
Toprak: Metro-Mix 360	Sun Gro Horticulture, Agawam, MA 0101-2907, ABD	Metro-Mix 360
			Zhao ve ark., 2016