Video, virüsle enfekte edilmiş embriyolu tavuk yumurtalarından toplanan berraklaştırılmış allantoik sıvıdan virüs partiküllerinin saflaştırılmasını ve konsantre edilmesini göstermektedir. Videoda, bütün virüsleri izole etmek için derinlemesine filtrasyon, teğetsel akış filtrasyonu ve yoğunluk gradyanlı ultrasantrifüjasyonu içeren bir dizi filtrasyon ve ayırma adımı sunulmaktadır. Virüs açısından zengin fraksiyon, ardından kalıntı tuzları ve gradyan bileşenlerini difüzyon yoluyla uzaklaştırmak için diyalize edilmekte ve ardından osmoz yoluyla hipertonik bir çözelti kullanılarak konsantre edilmektedir. Sonuç, deneysel kullanım için uygun, saflaştırılmış ve yüksek titreli bir virüs preparasyonudur.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Embriyonasyonlu Tavuk Yumurtalarının Allantoik Sıvısından Virüs Purifikasyonu
234 görüntülenme
⸱
31 Ağustos 2026
Bu makalede
Özet
Protokol
1. Belirlenmiş patojen içermeyen embriyonik tavuk yumurtaları kullanılarak Newcastle hastalığı virüsünün (NDV) amplifikasyonu
- Spesifik patojen içermeyen (SPF) embriyolu tavuk yumurtalarının inokülasyonu
NOT: Genellikle, bir in vivo kalite Newcastle hastalığı virüsü (NDV) partisi üretmek için sekiz düzine SPF embriyolu tavuk yumurtası kullanılır. Nakliye sırasında oluşabilecek hasarları ve canlılık değişkenliğini hesaba katarak bir veya iki düzine fazladan yumurta sipariş edin.- SPF embriyolu tavuk yumurtalarını teslim aldıktan sonra, 37 °C sıcaklık ve %60 nemdeki bir yumurta inkübatöründe 9 gün boyunc....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1: Belirlenmiş patojen içermeyen embriyonik tavuk yumurtalarının NDV ile enfeksiyonu ve hasadı. (A) Embriyo hareketine ek olarak, 9 günlük inkübasyon sonrası ağ benzeri damarlanma (oklar) belirgin olmalıdır. 'X', koriy.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1 mL Slip-Tip Şırınga | BD | 309659 | |
| 10 mL Luer-Lok Şırınga | BD | 302995 | |
| %10'luk Povidon İyot Çözeltisi | LORIS | 109-08 | |
| 15 mL Konik Tüpler | Thermo-Fisher | 14955240 | |
| 18G x 1 1/2 in Kör Uçlu Dolum İğnesi | BD | 305180 | |
| 18G x 1 1/2 in Precision Glide İğne | BD | 305196 | |
| 25 G x 5/8 in İğne | BD | 305122 | |
| 5 mL Luer-Lok Şırınga | BD | 309646 | |
| Glasyal Asetik Asit | Thermo-Fisher | A38-212 | |
| Agaroz | Froggabio | A87-50G | |
| Alexa-Fluor 48 Keçi Anti-Fare | Invitrogen | A1001 | |
| Allegra X-14 Santrifüj | Beckman Coulter | B0861 | |
| Amonyum Persülfat | BioRad | 161-0700 | |
| Çamaşır suyu (%5) | Thermo-Fisher | 36-102-0599 | |
| Geniş, tırtıksız uçlu forseps | Thermo-Fisher | 09-753-50 | |
| Bromofenol Mavisi | Sigma-Aldrich | 1405-25G | |
| Centramate Kaset Tutucu | PALL | CM018V | |
| ChemiDoc XRS+ | BioRad | 1708265 | |
| Dijital 1502 Sportsman Yumurta İnkübatörü | Berry Hill | 1502W | |
| D-Mannitol | Sigma-Aldrich | M4125-500G | |
| Yumurta Işığı | Berry Hill | A46 | |
| Etanol (%70) | Thermo-Fisher | BP82031GAL | |
| Dişi Dişli T Bağlantı Parçaları, naylon, 1/8 inç NPT(F) | Cole-Parmer | 06349-50 | |
| Nem Kiti | Berry Hill | 3030 | |
| Iodixanol | Sigma-Aldrich | D156 | su içerisinde %60 (a/h) iodixanol çözeltisi (steril) |
| L-Lizin Monohidroklorür | Sigma-Aldrich | 62929-100G-F | |
| Erkek ve Dişi Luer-Lok 1/8 inç ulusal boru dişi, NPT | Cole-Parmer | 41507-44 | |
| Masterflex L/S Dijital Sürücü | Cole-Parmer | RK-0752-20 | Dijital ekranlı perıstaltik pompa |
| Hassas Borular için Masterflex L/S Easy Load Pompa Başlığı | Cole-Parmer | RK-07514-10 | |
| Masterflex Silikon hortum (Platin) L/S 16 | Cole-Parmer | 96420-16 | BioPharm Platin Kürlenmiş Silikon |
| Omega Membrane LV Centramate Kaseti, 10K | PALL | OS10T02 | |
| Optima XE-90 Ultrasantrifüj | Beckman Coulter | A9471 | |
| 10X PBS Çözeltisi | Thermo-Fisher | BP39-20 | |
| Poli(Etilen Glikol) Ortalama Mn 20.0 | Sigma-Aldrich | 81300-1KG | |
| Slide-a-lyzer Diyaliz Kaseti (Ekstra Dayanıklı), 10.00 MWCO 0,5-3 mL | Thermo-Fisher | 66380 | |
| Sodyum Hidroksit (Pelet) | Thermo-Fisher | S318-10 | |
| Spesifik patojen içermeyen yumurtalar | Kanada Gıda Denetim Ajansı (CFIA) | YOK | Tedarikçi, konuma göre değişiklik gösterecektir |
| Sükroz | Thermo-Fisher | S5-3 | |
| Supracap 50 Derinlik Filtresi | PALL | SC050V10P | |
| Cerrahi Makas | Thermo-Fisher | 08-951-5 | |
| Sw41Ti Rotoru | Beckman Coulter | 331362 | Protokol adımları 2.3.1, 2.3.6 ve 2.3.7'de kullanılmıştır. |
| SX4750 Rotoru | Beckman Coulter | 369702 | |
| Konik Tabanlı Tüpler için SxX4750 Adaptörü | Beckman Coulter | 359472 | |
| İnce Duvarlı Ultraclear santrifüj tüpleri (9/16 inç x 3 1/2 inç) | Beckman Coulter | 344059 | |
| Hortum Sıkıştırma Kelepçesi | PALL | 88216 | |
| Yardımcı Basınç Göstergeleri | Cole-Parmer | 68355-06 |
