Bu video, insanlaştırılmış bir sıçan karaciğer iskeletinde adeno-ilişkili virüs aracılı gen iletimini göstermektedir. Vektör, floresan bir raporlayıcıyı ve gen susturucu RNA'yı kodlayan bir transgeni, reseptör aracılı endositoz yoluyla karaciğer hücrelerine iletir. Bu model, perfüze edilmiş 3D bir karaciğer doku sisteminde etkili transdüksiyonu destekler.
Yöntem makalesi
Adeno-ilişkili Virüs Vektörleri Kullanarak Hümanize Sıçan Karaciğerinin Transdüksiyonu
42 görüntülenme
⸱
31 Ağustos 2026
Bu makalede
Özet
Protokol
Karaciğer Modelinin Transdüksiyonu
- Uygun hacimde fosfat tamponlu salin (PBS) ekleyerek, adeno-ilişkili virüs (AAV) vektör çözeltisini 5 ml'de 2.7 x 1013 vektör genomu nihai konsantrasyonuna ayarlayın.
- Tüpleri kanülden çıkararak karaciğeri medya devresinden ayırın. Portal ven kanülüne 5 ml'lik bir şırınga bağlayın ve AAV vektör çözeltisinin tamamını (5 ml) enjekte edin.
- NOT: AAV vektör çözeltisinin karaciğer genelindeki dağılımını izlemek için isteğe bağlı olarak fenol kırmızısı (5 µg/ml) ekleyin.
- Pompalama yapmadan 1 saat boyunca inkübe edin. Akış hızını kademeli olarak artırın; 10 dakika boyunca 1.25 ml/min, 20 dakika boyunca 2.5 ml/min ve 30 dakika boyunca 3.75 ml/min ile başlayın. Reselülerize edilmiş sıçan karaciğerini 6 gün boyunca kültüre edin.
- NOT: Gün aşırı olarak medyanın üçte birini taze medya (50 ml) ile değiştirin. Laktat dehydrogenaz aktivitesi, medya örneklerinin pH'ı ile glukoz ve laktat konsantrasyonu gibi fizyolojik parametreleri ölçmek için kültür medyasından örnekler alın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| İnkübatör | Fraunhofer | / | |
| Peristaltik Pompa | Fraunhofer | / | |
| Yivli flanş | Duran | 2439454 | |
| Şeffaf O-Ring | Duran | 2922551 | |
| Hızlı Bırakma Kelepçesi | Duran | 2907151 | |
| Düz Flanş Kapak | Duran | 2429857 | |
| Vidalı Tüp | Duran | 2483802 | |
| Vidalı Tüp | Duran | 2483602 | |
| Silikon Sızdırmazlık Halkası | Duran | 2862012 | |
| Vidalı Kapak | Duran | 2924013 | |
| Vidalı Kapak | Duran | 2924008 | |
| Açıklıklı Vidalı Kapak | Duran | 2922709 | |
| Açıklıklı Vidalı Kapak | Duran | 2922705 | |
| Filtre | Sarstedt | 831,826,001 | |
| Silikon Hortum | VWR | 228-1500 | |
| Tüp konnektörü | Ismatec | ISM556A | |
| Biyouyumlu Hortum | Ismatec | SC0736 | |
| T175 kültür flaskları | Greiner bio-one | 660 160 | |
| RPMI 1640 | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0501-500 | |
| glutamin | BioWest SAS (Th. Geyer) | X0551-100 | |
| Tripsin | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0940-100 | |
| penisilin/streptomisin | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0022-100 | |
| fetal sığır serumu | cc pro | S-10-M | |
| HepG2 | DSMZ | ACC 180 |
