Hepatit E Virüsü Nanopartiküllerinin Transmisyon Elektron Mikroskopisi ile Görüntülenmesi

Özet

Kaynak: Chen, C. C., et al. Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods. J. Vis. Exp. (2018)

Bu video, geçirimli elektron mikroskobu ile görüntüleme amacıyla hepatit E virüsü benzeri nanopartiküllerin hazırlanmasını ve negatif boyanmasını göstermektedir. Yöntem, kendi kendine monte olmuş sadece kapsid içeren partiküllerin yapısal bütünlüğünü vurgulayarak, yüksek çözünürlüklü görüntüleme yoluyla bunların tekdüzeliğini ve saflığını doğrulamaktadır.

Protokol

1. Geçirimli elektron mikroskobu (TEM) kullanılarak Hepatit E Virüsü Nanopartiküllerinin (HEVNP'ler) Gözlemlenmesi
   1. TEM görüntüleme için HEVNP örneklerini 10 mM 2-(N-morfolino)etansülfonik asit (MES) pH 6.2 ile 0.5 - 2 mg/mL konsantrasyona hazırlayın veya seyreltin.
   2. Hidrofilik bir karbon yüzey oluşturmak için karbon kaplı ızgaraları 40 mA glow discharge ile 30 s boyunca iyonize edin. Glow discharge ekipmanı Materyal Tablosunda açıklanmıştır.
      NOT: Izgaraların hidrofilik karbon yüzeyi, glow discharge işleminin ardından yalnızca 30 dk boyunca kalıcı olabilir.
   3. Cımbızla tutun ve ızgaraya 2 µL HEVNP örneği ekleyin, 15 - 30 s bekleyin ve filtre kağıdıyla kurulayın.
   4. Izgarayı hemen ddH₂0 ile yıkayın ve filtre kağıdıyla kurulayın.
   5. Izgaraya hemen 2 µL %2 uranil asetat ekleyin, 15 s bekleyin ve ardından filtre kağıdıyla kurulayın. Örnek ızgaralarını gece boyunca elektronik bir nem alma kurutma kabinine koyarak kurutun.
   6. Izgarayı bir TEM'e transfer edin ve 10-80k büyütmede görüntüleyin. Viral RNA'nın yokluğu nedeniyle HEVNP'ler, TEM'de ~27 nm çapında boş ikosahedral proteinler olarak görünür.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
MES Hidrat	Sigma-Aldrich Chemical Co	M8250-250G	MES
EMS Glow Discharger	Electron Microscopy Science		glow discharger