Yöntem makalesi

Plazmid DNA Qiagen Miniprep Kit kullanarak Bakteri kolonileri Arındırıcı

36.4K görüntüleme

DOI:

10.3791/247

29 Temmuz 2007

Bu makalede

Özet

E. coli plazmid DNA arıtma moleküler klonlama için bir temel tekniktir. En az 5 ml bakteri kültürü Küçük ölçekli arıtma (miniprep) daha fazla enzimatik reaksiyonları (polimeraz zincir reaksiyonu ve restriksiyon enzimi sindirim) tarafından takip klon doğrulama ya da DNA izolasyonu, hızlı bir yoludur. Burada, moleküler biyoloji teknikleri için genel başlayanlar için bu son derece etkili bir tekniktir tanıtmak için amaçlayan QIAGEN QIAprep 8 Miniprep Kiti ile miniprep genel prosedürler, video kaydedildi. Tüm prosedürü yüksek tuz varlığı silika üzerine DNA adsorpsiyon takip E. coli hücrelerinin alkali lizis dayanır. 1) hazırlanması ve takas QIAprep membran, 3) yıkama ve plazmid DNA elüsyon üzerine DNA adsorpsiyon bakteriyel lizat, 2): Bu üç adımdan oluşur. Tüm adımlar, fenol, kloroform, CSCL, etidyum bromür, kullanmadan ve alkol yağış olmadan yapılmaktadır. Genellikle tüm prosedürü tamamlamak için en az 2 saat sürer.

Açıklamalar

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Plazmid DNA Safla t rmaBakteriyel Koloni MiniprepAlkalin Liziz Y ntemiQIAprep Miniprep KitiDNA Adsorpsiyon SilikasSantrif gasyon Protein PresipitasyonuVakum Manifold El syonuTampon P1 P2 P3Mikro t p DNA ToplamaB lgeye zg Mutagenez

İlgili makaleler