C57BL / 6 farelerinde Hc patogenezinde çalışma ve en iyi model sağlamak için kullanılmaktadır. Biz bu mantara karşı sıvısal bağışıklığın potansiyel yararları keşfetmek ve histon H2B ve ısı şoku proteini 60kDa] üretilen çeşitli mAbs intraperitoneal uygulamadan sonra koruyucu etkinlik için test ettiğim.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Karşı Monoklonal Antikorlar Pasif Yönetim H. capsulatum Ve Diğerleri Fungal Patojenler
Bu makalede
Özet
Özet
Bu metodoloji kullanım amacı bireyleri korumak için mantar Histoplasma capsulatum ve 2) tedavi için hedef olarak virülans faktörleri rol incelemek için neden histoplazmozis önlemek veya tedavi etmek için antikor ya da aşı ile kapasitesini ilerletmek için 1). MAb oluşturmak için, fareler aşı, bağışıklık yanıtlarını laboratuvarda geliştirilen bir katı faz ELISA sistemi kullanılarak değerlendirilir ve en iyi cevaplayıcı fareler hibridoma hücreleri ile füzyon için splenositlerin izolasyonu için seçilir. C57BL / 6 farelerin yoğun H. incelemek için kullanılan capsulatum patogenezi ve gerekli verileri elde etmek için en iyi modeli sağlamak. Enfeksiyon mAbs rolünü değerlendirmek amacıyla, fareler H. mAb ya intraperitoneal yolla capsulatum veya izotip ya intravenöz (iv), intraperitoneal (ip), ya da burun içi (in) yolları kontrolü mAb eşlemeli ve daha sonra enfekte . Bilimsel literatürde, farelerde mantar enfeksiyonları için mAbs etkinliği önceki zaman noktalarında koloni formin birim (CFU) değerlendirmeler ile birlikte, bir uç nokta olarak mortalite üzerine dayanır. En iyi insan hastalığı temsil Survival (ölüm) çalışmaları gereklidir. Böylece, bizim müdahale etkinliği yeterince sağkalım eğrileri olmadan kurulacak olmaz. Bu aşının etkinliği veya virülans için mutantlar test kurulması için de geçerlidir. Histoplazmozis, fareler genellikle birkaç saat içinde ölü enerjik olmak gidin. MAb idaresi gibi bir müdahale kapasitesi başlangıçta bir hayvan hastalığı korumak olabilir, ancak hastalığın nüks kısa CFU deneyler gerçekleştirilecek olmaz hangi. Hayatta kalma ve fungal yük testleri yanı sıra, enfeksiyon (histoloji, hücresel işe alım, sitokin yanıtları) inflamatuar yanıtları inceleyin. Farelerin hayatta kalma / ölüm deneylere zaman için, morbidite belirtileri için günde en az iki kez enfekte olan ve takip edilmektedir. Fungal yükü, histopatoloji ve sitokin yanıtları değerlendirmek için, farelerin enfeksiyondan sonra çeşitli zamanlarda ötenazi. Hayvan deneyleri Albert Einstein College of Medicine Hayvan Araştırmaları Enstitüsü'nün kurallarına göre yapılır.
Protokol
1. H. Büyüme Capsulatum
- 20 dakika UV ışını ile% 10 çamaşır suyu ile temizlik kabine mantar ile çalışmak için bir biyogüvenlik kabini hazırlayın. H. maya aşamasında kalıp formu BSLIII gerektirir capsulatum, Biyogüvenlik düzeyi (BSL) II uygulamaları gerektirir. Maya formu aşağıdaki adımları kullanın.
- Sonraki 5 ml PBS ile 15 ml konik tüp hazırlamak. Hasat bir koloni H. capsulatum BHI kan agar plaka [şekeri 10 g / L sistein 0,1 g / L, penisilin-streptomisin,% 1 ve koyun kırmızı kan hücreleri 50 ml / L (Colorado Serum Co, Colorado, ABD) (suşu Hc ATCC G217B ) 37 ° C'de ekili veya -8....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada sunulan protokol mAb H. olduğunu gösteriyor capsulatum deneysel fare histoplazmozis değiştirebilirsiniz. Patojenlerin hücre yüzey antijenleri Mablar bir ana ve bir patojen arasındaki etkileşimi sırasında meydana gelen karmaşık dinamiklerini değiştirebilir. Bu çalışmada, intraperitoneal olarak enjekte görünüz mAbs ölümcül histoplazmozis bir fare modeli koruma arabuluculuk kurar ve aşı geliştirilmesi için aday proteinler, H2B, M antijeni (katalaz yüzey) (3) ve Hsp60 olarak önerir. In vivo olarak, .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Malzeme Adı | Şirket | ||
| Biyolojik güvenlik kabini (BSL2) | |||
| 15 ml konik tüpler | Falcon, BD | ||
| HAM F-12 orta | Gibco | ||
| 37 ° C çalkalayıcı | |||
| Girdap | |||
| 50 ml konik tüpler | Falcon, BD | ||
| 26G1 / 2 iğne | BD | ||
| 10 ml şırınga | BD | ||
| 250 ml şişeler | |||
| FPLC (Hızlı protein sıvı kromatografisi) sistemi | GE Helthcare | ||
| ELISA okuyucu | BioTek | ||
| Anestezi (ketamin ve Xylazine) | |||
| Sütun duruyor | |||
| Naylon dize | |||
| Isı lambası | |||
| 70μm hücre Strainer'lar | Falcon, BD | ||
| BHI agar plakaları | Gibco |
Kaynaklar
- Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide. J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).
- Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. Monoclon....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
