$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Cihaz
Tüm testler için, yumuşak yastıklı yüzeyi düşmek herhangi bir fare yastık için cihazı dibinde yerleştirilir. NB Bu cihaz herhangi bir belirsiz etmemek için, şekillerde gösterilmemiştir. Farenin yüzlerce testleri sırasında, normal ve mutant hem de, genellikle 30-50 cm yüksekliğinde bu cihaz, düşen neden olduğu herhangi bir hasar tespit hiç. Ayrıca, test edilen her fare arasında ekipman temiz ve sterilize ediniz.
1.1 Rotarod
Piyasada bu cihazın çeşitli ticari versiyonları, ancak bazı, motor koordinasyon bozukluğu (yerine dayanıklılık daha) tespit etmek için yeterli bir hızda hızlandırmak için başarısız gibi, dezavantajları var. Başka bir yaygın hata çubuk bırak ya da atlamayın eğilimi farelerde sonuçlanan taban üzerinde yeterince yüksek olmadığıdır.
Şekil 1 'de gösterilen döner çemberde geçirdiği tasarımı için yapıldıOxford Farmakoloji, Üniversitesi bölümünün mühendislik bölümleri tarafından yazarın. Çubuk 30 cm düzeneğin taban üzerinde desteklenmektedir, çapı 3 cm olan. Yüzey fareler (Şekil 2) etkin bir kavrama sağlayan, uzunlamasına ekseni boyunca paralel sırtlar bir dizi tırtıllı edilir. NB sırtlar derinliği çok önemli bir detay, fareyi iyi bir kavrama alınamıyor test çok zor olacak, diğer taraftan, kavrama çok iyi ise fare pasif tutarak çubuk etrafında "çemberi" olacak ona gör. "Amatör rotarod makineleri" için fareler için uygun bir boyutta tırtıllı ahşap dübelleme ticari olduğunu bilmek yararlı olabilir, tabii ki kullanmadan önce iyi bir su geçirmez vernik ile tedavi edilmesi gerekir. Başlangıç hızı 4 rpm, 20 devir / dk 'ya kadar ivme oranına ayarlanır. Maksimum hızı 40 rpm.
İki çubuk bırakarak fare önlemek flanşlar. Bunlar çapı 30 cm (bu vardırmuhtemelen) 20 cm azaltılabilir. Onların ayrılması 6 cm (maksimum) olarak belirlenmiştir ancak çubuk etrafında açmak eğilimi varsa alt yetişkin fareler için küçük ayarlanması gerekebilir.
1.2 Üçlü yatay çubuklar (Şekil 3)
Çubuklar pirinçten imal edilmiştir, 38 cm uzunluğunda, her iki ucunda ahşap bir destek sütuna göre tezgah yüzeyi üzerinde 49 cm düzenledi. Sütunlar ağır bir ahşap tabanına teminat altına alınmıştır. Üç bar çapları mevcuttur: 2, 4 ve 6 mm. 2 mm çubuk kullandığımız standart biridir, ancak birçok fareler bu maksimum puanları ulaşır. Bu nedenle daha geniş çaplı bar fareler bu kadar iyi kavrama değil gibi, test geliştirmek için bir girişim dahil edilmiştir.
1.3 Statik çubuklar
Değişen kalınlığı (35 (çubuk 1), 28, 22, 15 ve 9 (çubuk 5) mm çapında) Beş ahşap dübel veya çubuklar her 60 cm uzunluğunda çubuklar yatay çıkıntı böyle bir laboratuvar raf için bir G-kelepçe ile giderilen içine alan (Şekil 4). Sonutezgah yakınında, çubuğun bir işareti kaplama hattı göstermek için uçtan 10 cm, sahiptir. Zemin üzerinde çubuklar yüksekliği 60 cm'dir.
Daha kısa ve daha az detaylı testi gerekiyorsa, sadece büyük, küçük ve orta çubuklar kullanın. Van Dellen ve arkadaşları. 14. farelerde Huntington hastalığı ilerlemesini değerlendirmek için sadece tek bir çubuk kullanılır.
1.4 Paralel barlar
Çapında iki paralel çelik çubuklar uzunluğunda 1 m ve 4 mm uçları (Şekil 5) ahşap destek sütunları tarafından ayrı 30 mm (kendi merkezlerine) sabitlenir. Çubuklar yerden 60 cm.
2. Prosedür
Tüm testler için, tam uyanık olmasını sağlamak için, test önce deneysel oda 5-20 dk fareler getirmek. Genel bir kural olarak, kas gücü ve uyarılma normal seviyelere dönüş kurtarma izin vermek için, her motor test sonra evde kafes dönüş tarafından fareler dinlenme.
2.1 Rotarod
4 rpm, ivme hızı 20 devir / dakika arasında bir başlangıç hızı ile rotarod ayarlayın. Kuyruk tarafından fare Holding ve dönen çubuk üzerine yerleştirin, bu dik kalmak için ileri yürümek zorunda böylece dönüş yönü dönük. Bu fare yatay altında 45 ° 'lik açıyla çubuk doğru gündeme eğer yapmak kolay değil, yukarıdan fare düşürmek için çalışırken onun arka ayakları yaymak ve flanşların kenarları açgözlü neden olacaktır. Neredeyse çubuk dokunuyor zaman hızlı bir şekilde kolayca çubuk kavrama sağlayan, sadece ileri üst ölü merkezi ve çubuklar üzerinde, fareyi bırakın. Bir (muhtemelen daha kolay ve güvenilir) tekniği ile ince bir (10-15 mm) dübel kullanmaktır. Bir elinde fare tutarak, uzun eksenine paralel, dübel için üzerine indirin. Dübel bu yayımlandıktan sonra rotarod kavrama için daha fazla zaman vermek için 30 ° yaklaşık fare kafası aşağıya doğru açılı. Tarihleri arasında fare ve dübel indirine rotarod flanşlar, ve bir kez dönen çubuk üzerinde çubuk kavramak ve ileriye yürüyecek olan, uzakta fare dübel aşağı doğru çekin.
10 sn çubuk üzerinde fare yerleştirdikten sonra, (fare ileriye dönük olduğundan sürece: değilse, bu ivme başlamadan önce ileri yüz yapar kadar beklemek) ivme başlatın ve fare düşer hızını unutmayın. Bu 10 saniye önce düşerse, düşme sırasında not edin ve 10 saniye noktadan sonra ilk düşüş hızını kayıt, toplam üç defa tekrar deneyin. Ancak, kayıt olmamalıdır deneyci tarafından kötü yerleştirerek nedeniyle 5 saniye önce düşer. Sonbahar ortalama hızı veri, daha ziyade maksimum hızı kullanmak yerine, bu fare performansı yardımcı olacak varsayılır başarısız çalışır, sırasında aldığı ekstra uygulama için düzeltir. Böylece 10 saniye önce düşen bir fare bir kez daha sonra 12 rpm kadar ikinci kez puanları (4 +12) / 2 = 8 rpm kalır. Iki kez daha sonra düşen bir fare10 rpm puanları (4 +4 +10) / 3 = 6 rpm için kalıyorum. Bir fare 10 kavrama başarısız olursa sn üç kez 4 rpm bir puan atayın.
Bir sorun fareler de pasif takla yuvarlak, en sonunda düşmek olsa da, böylece, bazen ileri yürüme durdurmak ve sıkıca yerine çubuk kavrama olmasıdır. Bu nedenle, ilk olarak bu tersine çevrilmeye oluşur Ayrıca hız not etmek yararlı olabilir. Olası bir çözüm daha büyük çaplı bir ya da daha az belirgin sırtlar ile bir çubuk kullanmak olabilir.
2.2 Yatay bar
Fareler dar 2 mm çubuk kavramak için kolay bulmak gibi, bu bir ilk onları test etmek için tavsiye edilir. Kuyruk tarafından fare Holding, cihazın önündeki bankta yerleştirin, 20 cm (bu bara dik hizalar) hakkında hızlı bir şekilde geriye doğru kaydırın, hızla yükseltmek ve onunla merkez noktada yatay çubuk kavramak izin onun forepaws sadece ve aynı anda stopclock başlayarak kuyruk bırakın. Bu cbir verimli elde etmek zor olabilir, kuyruk aniden serbest, bazı fareler kavrama daha iyi, onlar hala desteklenmektedir hissediyorum eğer kavrama başarısız olabilir. Bir forepaw bir sütun dokunur kadar fare çubuğunun sonunda sütunlardan biri, ya da zaman ulaşmadan önce kriter noktası ya bardan bir düşüş olduğunu. Maksimum test süresi (kesme süresi) 30 sn.
Fareyi doğru ilk kez barda kavramak için başarısız olur ve bu deneyci tekniği atfedilebilir görünüyorsa, yerine fare daha, yeniden deneyin (başka bir veya iki fare test sırasında kısa bir dinlenme sonrası) ve bu sonbaharda kayıt yok. Fareyi 5 saniye önce düşer ve bu görünüşte deneyci tarafından kötü yerleştirilmesi nedeniyle değilse, bir> 5 sn puanı almak için bir girişim üç kata kadar tekrarlayın. > 5 sn ikinci denemede, üçüncü bir deneme yapmazsanız. Noktasını referans noktası olarak en iyi puanı almak. Tekrar tekrar sadece 1> 5 saniye puanları için kendisini desteklemek için başarısız bir fare.
Üç bar sürümü kullanılıyor ise bu ilk 2 mm çubuk üzerinde fare puanları 5 ise başka bir veya iki fare test ederken, daha sonra kısa bir dinlenme döneminden sonra, kalın çubukları üzerinde test edilebilir. 4 ve 6 mm barlar için skorlama sistemi 2 mm çubuk için aynıdır ve kümülatif skor toplamıdır. Böylece fare bu 2 mm çubuğunda puanları 5 ama 5 +3 = 8 13 sn puanları sonra 4 mm çubuğundan düşer.
2.2.1
Yatay çubuklar Puanlama: İlk iki aralıklarla fareler başlangıçta düşme olasılığı daha düşüktür görev hakim olması kez olarak son iki daha az:
1-5 sn = 1 arasında Falling
6-10 saniye arasında Falling = 2
11-20 sn arasında Falling = 3
21-30 sn arasında Falling = 4
30 sonra Düşen sn = 5
= 5 düşmeden bir bar destek tek forepaw yerleştirme
4 ve 6 mm bar isteğe bağlı kullanımı gibi NB henüz kapsamlı yok bizim protokolüne yeni bir ektironlarla deneyim.
2.3 Statik çubuklar
En geniş çubuk (ucundan burun ucu bir kafa boyu ideal) en ucunda fare yerleştirin. Oryantasyon süresi (raf doğru başlangıç pozisyonundan 180 ° yönlendirmek için geçen zaman) ve geçiş süresi (raf sonunda (çubuğun raf ucundan 10 cm işaretinin ötesine burun) seyahat için harcanan zaman: iki tedbirler alın.
Oryantasyon dik kalan fare bağımlı değil, ters döner ve çubuk altında tutunur ise, keyfi (istatistiksel amaçlı) 120 sn en fazla yönelim puan atayın. Daha küçük çubuklar üzerinde test etmeyin, aynı zamanda geçiş süresi tabii ki daha iyi baş aşağı asılı iken transit bir daha koordine edilmektedir dik transit bir fare olarak maksimum değeri olur.
, Yönlendirme sonra, fare düşer ya da s üzerinde test yok maksimum test süresi (keyfi 120 sn olarak belirlenmiştir) ulaşırsamaller çubuklar. Istatistiksel amaçlarla, düşen atamak fareler yine dar bir çubuk düşeceği kabul edilir gibi, o çubuk ve sonraki olanlar için 120 atanır. Fareyi ters dönerse, bu olayı not; başarılı geçiş yanı sıra oryantasyon için çubuk üzerinde dik kalmalıdır. Aksi takdirde en yüksek puan atayın. Bu çubuk veya düşme sonuna ulaştıktan sonra fareyi çıkarın.
Bir çubuk üzerinde test ettikten sonra başka bir fare test ederken dinlenmek için ev kafesine fare dönmek. Daha sonra bir sonraki küçük boyutu çubuk üzerine yerleştirin ve yine aynı şekilde test edin. Fareyi fazla 5 saniye için olmak sonra bir çubuk kapalı düşerse test durdurun. Bu sn değiştirin ve üç çalışmaların en fazla bir girişim (5 sn giren deneyci tarafından hatalı yerleştirilmesi nedeniyle olabilir gibi), izin, ve en iyi sonucu kullanmak az 5 düştü eğer.
2.4 Paralel barlar
T fare yerleştirinbarlar buna boyuna ekseni dik ile iki bar o merkezi; hem ön pençeleri bir çubuk olmalıdır, diğer çubuğunda her iki arka pençeleri. Puanlama statik çubuklar için olana benzer. Sonradan ucunu destekler biri ulaşıncaya kadar fare 90 başlangıç pozisyonuna ° ve zaman yönlendirir kadar geçen süre: iki tedbirler alın. Fareyi ters dönerse, bu olayı not edin. Testi, yönlendirme ve transit baş aşağı çevirmeden sağlanmalıdır statik çubuklar gelince, aksi takdirde en uzun süre ayrılmıştır. Makul sağlıklı fareler az 5 saniye düşmeye için nadirdir, bu ne yaparsa muhtemelen kötü yerleştirerek kaynaklanmaktadır. Bu nedenle sonuç atmak ve fare tekrar test edin.