Drosophila melanogaster testisler hızla ve verimli bir şekilde diseksiyon iğneleri kullanarak yetişkin erkekler izole. Uygulama ile kolayca yüksek verim sıralama ya da daha geleneksel bir moleküler biyoloji yöntemleri ile DNA veya RNA veya protein analizi için yeterli antikor veya enzim tabanlı deneyleri için testislerin bir ya da iki gün içinde bir miktar ayırabilirsiniz.
Yöntem makalesi
İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler
Bu makalede
Özet
Özet
Drosophila melanogaster testisler, kök hücre bakım ve farklılaşma, mayoz ve soma-germline etkileşimleri çalışmaları için önemli bir model sağlar . Testisler genellikle 0-3 gün, pupa halinde eclosion sonra yetişkin erkekler izole edilmiştir. Yabani tip sineklerin testisler kolaylıkla çünkü sarı diğer dokulardan ayrılır, ama beyaz mutant sinekler testisler, laboratuvar deneyleri için ortak bir genetik arka plan sinek gut şekil ve renk olarak benzer. Cam bir mikroskop lamı üzerine siyah bir arka plan ile diseksiyon Sahne testisler oldukça kolay tanımlanmasını sağlar. Testisler diseksiyon iğneleri kullanarak sinekleri kaldırılır. Testis diseksiyonu için forseps kullanımı protokolleri ile karşılaştırıldığında, yöntem, iyi uygulanan bireysel 400-600 testis alındı, saatte 200-300 yabani tip sinekler testisler incelemek sağlayarak, çok daha hızlıdır. Beyaz sinek veya testislerin boyutu azaltmak mutantlar Testisler incelemek ve genellikle saat başına verim 200-400 testisler zor.
Protokol
- Siyah bir arka plan ile bir cam mikroskop lamı olun: mikroskop, slayt olarak aynı boyutta 20 # beyaz kağıt kesin. Slayt boyutlu kağıt siyah renkli bir tarafı (örneğin, Sharpie) kalıcı bir kalem kullanarak. Siyah tarafı beyaz tutkal (Elmer) uygulayın ve slayt için kağıt yapışır. Slayt yeniden kullanılabilir. Kullanarak ¾ "etiketi bant (Fisherbrand), CO 2 sinek pedi bir yere sabitlemek için, mikroskop lamı, cam tarafı güvenli.
- 0-3 gün eski erkek sinekleri toplayın.
- Bir kova buz hazırlayın, salin (PBS), diseksiyon iğneleri fosfat tamponlu.
- CO 2 akışı kullanarak 50-100 sinekler Anesteziyoloji ve mikroskop lamı yakın sinek ped şişe veya flakon aktarabilirsiniz.
- Pipet ~ mikroskop lamı ortasında bir damla 50 ul buz gibi soğuk PBS.
- Yavaşça bir erkek sinek pick up diseksiyon PBS düşüş içine iğne yerinde sinek PBS, nazik bir dokunuş ventral tarafı (yani, kanatları yakın) içine diseksiyon iğne iğne daldırma.
- Sıkıca aşağı iterek, toraks ve karın arasında, sinek ortasına bir iğne yerleştirin. Altıncı (A6) ve yedinci (A7) karın kesimleri (alttan ikinci ve üçüncü çizgiler) arasındaki diğer iğne yerleştirin; karın toraks uzak çekin.
- Testis dışında diğer organları, özellikle bağırsak Tease. Özellikle beyaz mutantlar, testis ve bağırsak benzer. Önemli farklılıklar her zaman çift testis ki; her testis bir spiral desen ve gut daha renkli daha beyaz.
- Testislerin bir polipropilen mikrosantrifüj tüp buz gibi soğuk PBS içinde saklayın.
Temsilcisi Sonuçlar:
Şekil 1. Flybase.org/reports/FBim0000074.html erkek üreme sisteminin Dorsal görünümüdür. Flybase atıf. "Sayfa 508 Şekil 38 A Miller (1950) sonra A. Miller Drosophila melanogaster imago iç anatomi ve histoloji M. Demerec, editör, Drosophila, bölüm 6, sayfaları 420 Biyoloji 534. Cold Spring Harbor Laboratuvarı'nda basın, faks baskı, 1994 Copyright Cold Spring Harbor Laboratuvarı'nda Press tarafından 1994. tür izin Basın Cold Spring Harbor Laboratuvarı (CSHL) ile birlikte kullanılır. http://www.cshlpress.com .
Tartışma
Biz yetişkin erkek Drosophila melanogaster testisler izole etmek için bir protokol sağlar. Teknik biri iki el koordinasyonu gerektirdiğinden, beceri, sadece uygulama ile geliyor.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Yazarlar Vasia Vagin laboratuvarımızda bu tekniği tanıtmak için teşekkür ederiz.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Diseksiyon iğnesi | Araç | Fisher Scientific | S17346 | |
| Mikroskobik Lamlar, Düz | Araç | Fisher Scientific | 12-553 | |
| Mikroskop Işığı | Araç | Schott AG | KO-1500 | |
| CO2 pedi | Araç | Genesee Scientific | 59-172 | |
| Benchtop Flowbuddy Komple Sistemi | Araç | Genesee Scientific | 59-122WCU | |
| Kabarcıklı Nemlendirici | Araç | Salter Labs | 7100 | |
| Top doldurma iğnesi | Araç | Genesee Scientific | 54-119 | |
| ¾” Etiket Bandı | Sarf Malzeme | Fisher Scientific | 15-901-5B |
Kaynaklar
- Singh, S. R., Hou, S. X. Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell. Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).
Yeniden basım ve izinler
