Bu yöntem, farelerde meme bezi gelişimi ve işlevi incelemek ve değerlendirmek anlatılmaktadır. Eksize meme bezleri süt ejeksiyon bir oksitosin tabanlı miyoepitelyal hücre daralma tahlil kullanılarak değerlendirilmiştir ise bütün montaj kullanarak geliştirme derecesi değerlendirilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare Modeller Meme Bezi Geliştirme ve Fonksiyon Değerlendirme
Bu makalede
Özet
Özet
Insan meme bezi 15-20 lobların oluşan salgılar süt meme dallanan bir kanal sistemi ağzına. Bu loblar kendilerini salgı alveoller ve kanalları yakınsak 1 terminal kanal lobüler birimleri bir dizi oluşur. Farelerde, benzer bir mimari Hamilelik sırasında kanalları ve alveoller bağ dokusu stroma içinde serpiştirilmiş olduğu görülmektedir. Fare meme bezi epitel hücrelerinin iki kat, luminal hücreleri bir bazal membran 2 sınırları ile gösterilir miyoepitelyal hücrelerin dış tabakası ile çevrili bir iç tabaka oluşur kanalları sistemi gibi bir ağaç. Doğumda, sadece gelişmemiş duktal ağaç birincil kanal ve 15-20 şube oluşan mevcut. 3,4,5 hormonların etkisi altında yaklaşık 4 hafta başında ergenlik Şube uzama ve amplifikasyon başlangıç,. 10 hafta, stroma çoğu gebelik 2 kadar her östrus döngüsü dallanma ve regresyon döngüleri uğrayacaktır kanalları karmaşık bir sistem tarafından işgal edildi. Gebeliğin başlangıcında, ikinci bir gelişme aşaması alveoller 6,7 olarak adlandırılan üzüm şeklinde süt salgı yapıları oluşturmak için epitel proliferasyonu ve farklılaşması ile başlar . Doğum ve emzirme süresince, süt luminal salgı hücreleri tarafından üretilir ve alveoller lümen içinde saklanır. Oksitosin sürümü, yavruların emzirme ile indüklenen bir nöral refleks tarafından uyarılır, süt kanalları ile yavrular 8 için kullanılabilir hale gelir meme taşınacak sağlayan alveoller etrafında ve kanalları boyunca miyoepitelyal hücrelerin senkronize kasılmalar neden olur . Meme bezi gelişimi, farklılaşma ve fonksiyon sıkı yönetilen gerektirir, stroma ve epitel arasında değil sadece etkileşimleri, aynı zamanda, epitel 9,10,11 içinde myoepitelyal ve luminal hücreleri arasındaki . Böylece, bu etkileşimlerin karıştığı birçok gen mutasyonları, ergenlik veya alveoller, geç gebelik ve laktasyon 12,13 önde gelen salgı aktivasyon sırasında erken gebelik, farklılaşma sırasında oluşumu sırasında iki duktal uzama bozabilir. Bu makalede, biz fare meme bezlerinin incelemek ve bütün bağlar kullanarak kendi gelişimini değerlendirmek nasıl açıklar. Ayrıca, bir ex-vivo oksitosin tabanlı fonksiyonel assay kullanarak myoepitelyal kasılmaları ve süt ejeksiyon nasıl değerlendirileceğini gösteriyor. Meme bezi gelişimi ve işlevi üzerindeki bir genin mutasyon etkisi dolayısıyla mutant ve wild-tip kontrol farelerde bu iki teknik gerçekleştirerek in situ tespit edilebilir.
Protokol
1. Meme bezi diseksiyonu
- CO 2 inhalasyon kullanarak fare Euthanize. Diseksiyon daha zor hale boyun ve meme bezlerinin etrafında kan birikimi sonucu büyük kan damarlarının zarar verebilir bu yana servikal dislokasyon mümkünse kaçının. Ancak, aynı fare, oksitosin kan düzeyleri gibi diğer kriterler değerlendirilir olmak istiyorsak, alternatif ötenazi yöntemleri bu IACUC tarafından değerlendirilmesi gerekmektedir rağmen, gerekli olabilir.
- Folyo ile sarılı bir polistren köpük, sırtında fare ve dört bacağı yayılabilir. 16 - 20 gauge iğneler (Şekil 1A) kullanan tüm dört bacağı sıkıca sabitleyin.
- % 70 etanol ile cömertçe fare püskürt....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Meme bezinin gelişimi ve işlevi sıkı bir şekilde yönetti. Mutant fareler bez yapısı 13,12 değerlendirmek için gereğinin altını meme bezi gelişimi ve işlevi bozabilir gen mutasyonları limanı olabilir. Tüm montaj, meme bezi gelişimi tüm aşamalarında bu makalede açıklandığı gibi yapılabilir. Tipik olarak, epitel gelişimi, ergenlik (~ 4 hafta eski) başında, ergenlik (~ 6 hafta eski), orta ve 2,10 ergenlik (~ 10-12 hafta eski) sonra değerlendirilir . Bu aşamalarda, dallanma kanalı miktarı, terminal uç t.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışmalar CIHR ve DWL için CBCRA hibe ile finanse edilmiştir. IP CIHR-STP, FRSQ ve CIHR burs tarafından finanse edildi. MKGS OGS ve CIHR-STP burs tarafından finanse edildi. Yazarlar Kevin Barr fare üreme ile yaptığı yardım için teşekkür ederim.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif | Şirket | Katalog numarası | |
| Kırmızı | Sigma-Aldrich | C1022 | |
| Alüminyum potasyum sülfat | Sigma-Aldrich | A6435 | |
| Thymol | Sigma-Aldrich | T0501 | |
| Metil salisilat | Sigma-Aldrich | M6752 | |
| Oksitosin | Sigma-Aldrich | O3251 |
Kaynaklar
- Geddes, D. T. Inside the lactating breast: the latest anatomy research. J Midwifery Womens Health. 52, 556-556 (2007).
- Sternlicht, M. D. Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis. Brea....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
