$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Ameliyat için Stereotaktik Birimler Hazırlayın
- Tüm anestezi makinelerini, dijital Vernier tartılarını ve dijital enjektörleri açın.
not: Tüm cerrahi aletler ameliyattan önce yeterince temizlenmeli ve sterilize edilmelidir.
- Biyolojik güvenlik kabininde indüksiyon odası eki olan anestezik makineleri kullanın (Şekil 1A).
- Anestezi makinelerinden gelen tüm tüplerin stereotaktik çerçevelere bağlı olduğundan emin olun (Şekil 1B, iç kısım 1C) ve kullanılan tüm üniteler için tüpler üzerindeki kelepçelerin açık olduğundan emin olun. Ameliyat için kullanılmayacak stereotaktik çerçevelere giden tüplerdeki tüm kelepçeleri kapatın.
- Anestezi makinelerini, fare ağırlığına göre üretici tarafından önerilen burun konisi akış hızına ayarlayın (örneğin, 25 g hayvan ağırlığı: burun konisi akış hızı 34 mL/dak).
not: Bu stereotaktik kuruluma dahil olan kafa tutucu yalnızca yetişkin fareler için önerilir. Stereotaktik kurulumla birlikte verilen üretici tavsiyelerine uyulduğundan emin olun.
- Şırıngaya önceden doldurulmuş uygun anestezik maddenin (örn. izofluran) anestezi makinesine takıldığından emin olun (Şekil 1B).
not: Şırınganın aşırı astarlanması, ameliyat sırasında farelere çok fazla anestezi verilmesine ve anestezik doz aşımına neden olabilir.
- Sahne kilidini çevirerek, her matkaba bir matkap ucu adaptörü ve 1 mm'lik bir matkap ucu takarak matkapları hazırlayın ve uç kilidini manuel olarak sıkarak matkabı kilitleyin.
- Matkapları stereotaktik çerçevelere takın (Şekil 1C).
2. Fareleri Stereotaktik Çerçevelere Yerleştirin
- Yukarıda belirtilen indüksiyon odasını kullanarak fareleri (örn., izofluran) uyuşturun.
- Fareleri prosedür boyunca derin bir anestezik düzlemde tutun. Makine tarafından uygulanan anestezi yüzdesi, akış hızı, stimülasyon derecesi ve vücut ısısı dahil olmak üzere bir dizi faktöre bağlıdır. Ritmik solunumları değerlendirerek anestezi derinliği için prosedür boyunca fareleri sık sık izleyin (hayvan nefes nefese kalmıyor); palpebral refleks eksikliği (pamuk uçlu bir aplikatör ile uyarıldığında göz kapaklarının çırpınması); ve ayak parmağını çimdiklemenin olmaması (ayak parmaklarını sıkıştırmanın zararlı uyaranı üzerine uzvun geri çekilmesi).
not: Farklı fare suşları anesteziye farklı bir yanıt verecektir.
- Fareler uygun, derin bir anestezik düzlemde olduktan sonra, fareleri stereotaktik üniteye aktarın. Vücut ısısını ve uygun bir anestezi düzlemini korumak için fare stereotaktik makinedeyken bir ısıtma yastığı kullanın.
not: Düşük profil elde etmek için, ters çevrilmiş bir pipet ucu kutusu (Şekil 1D'de fare kaldırma kutusu) içine yerleştirilmiş havayla etkinleştirilen el ısıtıcıları kullanıyoruz.
- Farenin ağzını açın ve dişleri stereotaktik çerçeve üzerindeki burun parçası üzerinde bulunan ağız çubuğunun çukuruna yerleştirin (Şekil 2A). Burun konisini farenin burnunun/ağzının üzerine kaydırın (Şekil 2B).
- Fareleri başları ağız çubuğuna düz gelecek şekilde yerleştirin. Pamuk uçlu bir aplikatörün kör ucuyla ağzı nazikçe açın ve yerine kaydırın. Burun konisinin farenin burnunun tam olarak üzerinde olduğundan emin olun, aksi takdirde anestezi düzgün şekilde verilmeyecektir. Dişler bu oluğun içine oturmazsa burun konisi burunla birleşmeyecektir (İç Şekil 2A).
- Steril bir pamuklu çubuk kullanarak, farenin gözlerinin her birine göz kayganlaştırıcı sürün. Göz kayganlaştırıcısının uygulanması korneanın kurumasını azaltır ve kornea hasarı ve kornea travmasına bağlı postoperatif komplikasyon olasılığını azaltır.
- Sol kulak çubuğunu sol kulağın medial kantusuna doğru bastırarak farenin kafatasını sabitleyin ve stereotaktik çerçevedeki vidayı kullanarak yerine kilitleyin. Ardından, sağ kulak çubuğunu sağ kulağın medial kantusuna doğru kaydırın ve stereotaktik çerçeveyi sıkıca vidalayın (Şekil 2B).
not: Kulak çubuklarını yerleştirirken farenin kafasının düz ve düz olduğundan emin olun. Kafa eğri veya açılı ise, enjeksiyon beyinde yanlış yerde olacaktır. Kulak çubukları YALNIZCA orta derecede manuel sondalama ile stimülasyon üzerine kafatası hareketsiz hale gelene kadar sıkılmalıdır.
3. Bir Calvarial Penceresi Yapın
- Saç derisini, her biri bir betadin çözeltisi ve% 70 etanol olmak üzere 3 kez alternatif geçişle hazırlayın ve temizleyin. Cerrahi bölgenin gözlere yakınlığı nedeniyle, cerrahi fırçalama üzerinde betadin solüsyonunu kullanın.
- Steril bir neşter kullanarak, kafatasının merkezi medyan yönü boyunca (sagital sütür çizgisini takip ederek) deriden 3 mm'lik bir kesi yapın. Kesideki kanama minimal düzeyde olmalıdır. Meydana gelirse, steril bir pamuk uçlu aplikatör ile kanama bölgesine >30 saniye boyunca tutarlı, sıkı bir baskı uygulayın.
- Matkabı bregmaya dik olarak tanımlayın ve yönlendirin (Şekil 2C), dijital Vernier ölçeğini sıfıra sıfırladığınızdan emin olun.
- Matkabı sagital sütürün 2 mm lateralinden ve koronal sütürün 1 mm önünden hareket ettirin (Şekil 2C). Tekrarlanabilirlik için, sagital sütür hattının solundaki veya sağındaki konumun tüm hayvanlar için tutarlı kaldığından emin olun.
- Matkabı en yüksek hızına çevirin. Dönen ucun neden olduğu doku hasarını önlemek için cildin matkaptan uzaklaştırıldığından emin olun ve matkabı dikkatlice kafatasına doğru başlatın. Kalvaria boyunca kabaca 0,5 mm derinliğinde bir delik açın, bu da kalvarial pencereye neden olur. Matkabı çok fazla indirmemeye dikkat edin, aksi takdirde beyni deler. Matkap hareket halindeyken matkap alanına steril tuzlu su damlatmak, makine tarafından üretilen ve çevredeki dokuda termal hasara neden olabilecek herhangi bir ısıyı dengeleyebilir.
- Kalvarial pencere yapıldıktan sonra, matkabı dikkatlice kaldırın ve stereotaktik çerçeveden çıkarın.
- Matkap uçlarını %70 etanol kullanarak temizleyin ve tekrar kullanılıyorsa bir kenara koyun. Değilse, matkap uçlarını çıkarın ve %70 etanole batırın.
