Murin Beyninin Çırpıda Dondurma ile Dondurularak Saklanması: Histolojik Analiz için Tüm Fare Beyni Örneğini Hızla Dondurma Tekniği

Özet

Kaynak: Comba, A. et al. İntratümöral Heterojenliğin, Onkostreamlerin ve İnvazyonun Mekansal ve Moleküler Karakterizasyonu için Glioma Alt Bölgelerinin Lazer Yakalama Mikrodiseksiyonu. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu video, tümör dokularından ayrı anatomik alanları veya belirli hücre popülasyonlarını izole etmek için bir farenin beyninin dondurularak saklanmasını göstermektedir. Bu teknik, sonraki analizler için beyin dokusu morfolojisinin optimal optik çözünürlüğünün elde edilmesinde kritik öneme sahiptir.

Protokol

1. Glioma Tümörlerini Barındıran Beyinlerin Dondurularak Saklanması

1. Beyinleri dondurarak saklamadan önce, soğuk izopentan / 2-metilbütan ile doldurulmuş bir kavanoz hazırlayın ve sıvı nitrojenle dolu bir kaba koyun. Çözücünün soğumasını bekleyin.
2. Beyni% 30 sükroz çözeltisinden çıkarın ve bir filtre kağıdı üzerinde kurulayın.
3. Cryomold'u kalıcı bir işaretleyici ile etiketleyin. Hava kabarcıklarını önleyerek kriyokalıbın ortasına dikkatlice yaklaşık 5 mL OCT (optimum kesme sıcaklığı bileşiği) ekleyin.
4. Beyni, istenen yönde OCT içeren bir kriyokalıba yerleştirin. Beyin tamamen suya batırılana kadar kalıbı OCT ile d....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Tek Kullanımlık Gömme Kalıplarını Soyun	Elektron Mikroskobu Bilimleri	70182
Araştırma Kriyostatı	Leica Belediyesi	CM3050'ler
Doku Artı OCT Bileşiği	Balıkçı Bilimsel	23-730-571