Fare Beyninden Mononükleer Hücre İzolasyonu: Beyinde Yerleşik Mononükleer Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yoğunluk Gradyanlı Santrifüj Tekniği

Abstract

Kaynak: Ji, Z. et al. Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Merkezi Sinir Sisteminde Lenfosit İnfiltrasyonunun Akış Sitometrik Analizi. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu videoda, yoğunluk gradyanlı santrifüjleme kullanarak bir farenin beyninden mononükleer hücrelerin izolasyonunu gerçekleştiriyoruz. İzole edilmiş mononükleer hücre süspansiyonu, daha fazla aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Protocol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Beyinden Tek Hücreli Süspansiyon Hazırlığı

1. Nihai% 100 bir çözelti elde etmek için yoğunluk gradyan ortamını 15 mL'lik bir konik tüpte PBS ile 9: 1 oranında seyreltin.
2. % 1 sodyum pentobarbital (50 mg / kg) intraperitoneal enjeksiyonu ile EAE'nin zirvesinde fareleri anestezik hale getirin ve 20 mL steril buz gibi soğuk PBS ile intrakardiyal olarak perfüze edin. Bunu, 20 mL'lik bir şırınga kullanarak kalbin sol ventrikülüne PBS'yi yavaşça ve istikrarlı bir ş....

Results

Şekil 1: Mononükleer hücrelerin izolasyonu için Percoll gradyan kurulumunun şeması.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dounce homojenizatör	Wheaton	353107542
Percoll Belediyesi	Ge	17-0891-01