Kaynak: Schildge, S. et al. Fare Kortikal Astrositlerinin İzolasyonu ve Kültürü. J. Vis. Uzm. (2013)
Bu videoda, yeni doğmuş farelerden saf bir astrosit preparatı elde etme yöntemini açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Astrosit İzolasyonu: Fare Kortikal Astrositlerinin Saf Preparatını Elde Etmek İçin Bir Yöntem
5.2K görüntülenme
⸱
30 Nisan 2023
Bu makalede
Özet
Protokol
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Karışık Kortikal Hücrelerin İzolasyonu ve Kaplanması
Astrosit kültürleri için karışık kortikal hücre izolasyonu, P1 ila P4 fare yavruları kullanılarak gerçekleştirilebilir. Uygun astrosit yoğunluğunu elde etmek için, T75 doku kültürü şişesi başına 4 fare yavrusu korteksi kullanmak gerekir. Bu nedenle, aşağıdaki protokoldeki hacimler, 4 fare yavrusu kullanılarak bir hücre hazırlığı için hesaplanmıştır.
- Diseksiyon prosedürüne başlamadan ön....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1. Doğum sonrası (P3) fare korteksinin diseksiyonu. A) Tüm beyin. B) Koku soğancıklarının ve beyinciğin çıkarılmasından sonra beyin. C) Beyindeki korteksin plakaya benzer yapısının soyularak kortekslerin izolasyonu. D, D') Meninksli ventral ve dorsal bölgeden korteks (siyah oklar meningeal arterleri gösterir). E) Meninkssiz korteks. Ölçek çubuğu, 1,5 mm.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Astrosit kültür ortamı | |||
| DMEM yüksek glikoz | Yaşam Teknolojileri | 31966-021 | |
| FBS ısıyla etkisiz hale getirilir | Yaşam Teknolojileri | 10082-147 | Nihai Konsantrasyon: %10 |
| Penisilin-Streptomisin | Yaşam Teknolojileri | 15140-122 | Nihai Konsantrasyon: %1 |
| Beyin dokusu sindirimi için çözüm | |||
| HBSS (Türkçe) | Yaşam Teknolojileri | 14170-088 | |
| % 2.5 Tripsin | Yaşam Teknolojileri | 15090-046 | Nihai Konsantrasyon: %0,25 |
| Diğer | |||
| %70 (hacim/hacim) etanol | Roth | 9065.2 | |
| Poli-D-Lizin | Millipor A-003 | A-003-E | |
| Su | PAA (Türkçe) | S15-012 Serisi | Hücre kültürü sınıfı |
| Pbs | PAA (Türkçe) | H15-002 | Hücre kültürü sınıfı |
| % 0.05 Tripsin-EDTA | Yaşam Teknolojileri | 25300-062 | |
| 0.45 μm Steril filtre | Sartorius | 16555 | |
| 3,5 cm petri kabı | BD Şahin | 353001 | |
| 15 ml Falcon tüpü | BD Şahin | 352096 | |
| 50 ml Şahin tüpü | BD Şahin | 352070 | |
| 75 cm2 Doku kültürü şişesi | BD Şahin | 353136 | |
| Forseps iyi | Dumont | 2-1032; 2-1033 | #3c; #5 |
| Forseps düz uç | KLS kırlangıç | 12-120-11 | |
| 13 cm cerrahi makas | Aesculap Belediyesi | M.Ö. 140-R | |
| Stereomikroskop | Leica Belediyesi | MZ7.5 | |
| Stereomikroskop + Kamera | Leica Belediyesi | MZ16F; DFC320 | |
| Mikroskop + Kamera | Zeiss; Canon | Primo Vert; PowerShot A650 IS | |
| merkezkaç | Eppendorf Belediyesi | 5805000.017 | Santrifüj5804R |
| Yörünge Çalkalayıcı | Termo Bilimsel | SHKE 4450-1CE | Maksimum Q 4450 |
| Su banyosu | Julabo Belediyesi | SW20; 37 °C |
