Yöntem makalesi

Zebra Balığı Larvalarından Beyin Hücresi İzolasyonu: Zebra Balığı Beyin Dokusundan Sağlam Nöronlar, Makrofajlar ve Mikroglia Elde Etme Tekniği

4.1K görüntüleme

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

Kaynak: Mazzolini, J. et al. Larva Zebra Balığı Beyinlerinden Nöronların, Makrofajların ve Mikrogliaların İzolasyonu ve RNA Ekstraksiyonu. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, beyin dokusunu mekanik olarak bozarak larva zebra balığı beyinlerinden nöronları, makrofajları ve mikrogliaları izole etmek için bir protokol açıklanmaktadır. Saflaştırılmış hücre popülasyonları ayrıca genomik analiz için kullanılabilir.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Homojenizasyon

NOT: Tüm adımlar 4 °C'de gerçekleştirilir.

  1. 200 μM PTU ile muamele edilmiş 50 mL E3 embriyo ortamında 50 larva içeren 90 mm Petri kabına 1.5 mL Trikain (15 mM) ekleyin ve bunları terminal anesteziye tabi tutun.
    1. Petri kaplarından 10 anestezi uygulanmış larvayı 3 mL Pasteur plastik dökme pipet ile emdirin.
    2. Anestezi uygulanmış lar....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1-fenil 2-tiyoüre (PTU)SigmaP7629 Serisi
Hepes BelediyesiGibco (Gibco)15630-056
D-GlikozSigmaG8644-100ML
HBSS 1XGibco (Gibco)14170-088
Percoll BelediyesiGE Sağlık17-0891-02
HBSS 10X (HBSS)Gibco (Gibco)14180-046
DPBS 1XGibco (Gibco)14190-094
Trikain (MS222)SigmaA5040
Sterilin standart 90 mm petri kaplarıThermoFisher (Termo Balıkçı)101 VIRR
Cerrahi mikro makasGüzel Bilim Araçları15000-00
3 mL Pasteur plastik dökme pipetSlsPIP4206
Cam homojenizatörWheaton357538
Sterilin standart 55 mm petri kaplarıThermoFisher (Termo Balıkçı)P55V
Percoll BelediyesiGE Sağlık17-0891-02
40 μm hücre süzgecidoğan352340
50 ml polipropilen konik borudoğan352070
merkezkaçEppendorf Belediyesi5804 R
Normal keçi serumu (NGS)Hücre Sinyalizasyonu5425S Serisi
35 μm hücre süzgeç kapağıBd352235
Serisi Serisi arası Teknolojisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Zebra Bal Beyin zolasyonuN ron zolasyonuMakrofaj zolasyonuMikroglia zolasyonuDoku HomojenizasyonuYo unluk Gradyan Santrif jlemeH cre S zgeci FiltrasyonuD k H zl Santrif jlemeAnestezi Haz rlamaStereomikroskop Diseksiyonu

İlgili makaleler