CreER-LoxP Sistem Tabanlı Hedef Gen İnaktivasyonu: Bir Fare Modelinde Hedef Gen Nakavt için Tamoksifen ile İndüklenebilir Cre Rekombinaz Sistemi

Özet

Kaynak: Hubner, E. K., et al. Hidrodinamik Kuyruk Damarı Enjeksiyonu Kullanılarak Fare Hepatositlerinin Genetik İn Vivo Modifikasyonu için Yapısal ve İndüklenebilir Sistemler.J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, bir fare modelinde intraperitoneal tamoksifen enjeksiyonunu takiben tamoksifen ile indüklenebilen bir Cre-rekombinaz sistemi kullanılarak hedef gen nakavt prosedürü açıklanmaktadır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Transfekte CreER'in Tamoksifen ile İndüksiyonu

DİKKAT: Tamoksifen zararlıdır, kanserli olabilir veya doğurganlığa zarar verebilir. Lütfen güvenlik bilgi formuna bakın.

1. Art arda üç gün intraperitoneal tamoksifen enjeksiyonları planlayın.
2. 1. günde, 10 mg tamoksifeni 40 μL etanol içinde çözün. 55 °C'de 10 dakika inkübe edin. Tamoksifen çözülene kadar birkaç kez girdap.
3. 960 μL mısır yağı ekleyin. 55 ° C'de 5 dakika inkübe edin. Net bir çözelti elde etmek için birkaç kez döndürün.
4. Çözeltiyi 27 G'lik bir iğne ile 1 mL'lik bir insülin şırıngasında hazırlayın.
5. Farenin boynunu başparmağınız ve ikinci parmağınızla dikkatlice tutarak, kuyruğu elin tabanı ile dördüncü ve beşinci parmak arasına sabitleyerek fareyi sıkıştırın.
6. Çözeltinin 0.1 mL (= 1 mg tamoksifen) intraperitoneal olarak karnın sol alt kadranına enjekte edin.
7. Enjeksiyonları ikinci ve üçüncü günlerde tekrarlayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Injekt Şırınga F 1 ml	Braun	9166017V	İntraperitoneal enjeksiyon için
Tamoksifen	Sigma-Aldrich	T5648-1G	CreER aktivasyonu için
Mısır yağı	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	Tamoksifen enjeksiyonları için taşıyıcı

Gazetesi Gazetesi Serisi