Genom Düzenleme Teknikleri

Bu video, hedeflenen nükleotid ikamesini indüklemek için CRISPR aracılı sitozin baz düzenleyicileri kavramını açıklamaktadır.

Bu videoda, Cas9 ve sgRNA'nın hücrelere tek bir plazmit yapısı olarak sağlandığı kültürlenmiş hücrelerde hepsi bir arada CRISPR-Cas9 tabanlı genom düzenlemeyi gösteriyoruz. CRISPR-Cas9 sistemi ve eklenmesi istenen gen, başarılı gen düzenlemesini kolaylaştırmak için elektroporasyon tekniği ile hücrelere sokuldu.

Bu video, insan pluripotent kök hücrelerinde (hPSC'ler) çinko parmak nükleaz tabanlı genom düzenleme tekniğini göstermektedir. hPSC'ler potansiyel olarak çeşitli hücre tiplerine ayrılabildiğinden, bu teknoloji hastaya özgü bir şekilde in vitro patolojik ve farmakolojik çalışmalar için yararlıdır.

Bu videoda, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerde veya hiPSC'lerde, hedeflenen bir lokusta çift sarmallı kırılmalar oluşturmak için TALEN'leri kullanarak floresan protein gen entegrasyonu için homolojiye yönelik onarımı indükleyen hassas bir genom düzenleme tekniği açıklanmaktadır.

Bu videoda, mikroenjeksiyon yoluyla Anopheles embriyosunda phiC31 aracılı bölgeye özgü transgen entegrasyonunu gösteriyoruz. Bu yöntem, istenen genlerin araştırma ve endüstriyel uygulamalar için bir konak sisteme sokulmasına yardımcı olur.

Bu videoda, Agrobacterium aracılı ikili bakteriyel yapay kromozom tabanlı gen dönüşümü yoluyla kararlı transgen ifade eden transgenik Arabidopsis bitkilerinin neslini gösteriyoruz.

Bu videoda, floresan voltaj göstergesini kodlayan transpozaz mRNA'sı ve Tol2 transpozon yapısını içeren Tol2 transpozon sisteminin birlikte enjeksiyonunu takiben bir floresan voltaj gösterge proteinini yapısal olarak ifade eden kararlı bir zebra balığı transgenik hattı oluşturmak için bir prosedür gösteriyoruz.

Bu video, soya özgü transkripsiyon faktörlerinin ektopik ekspresyonu ile PiggyBac transpozon sistemi ile insan iPSC'lerinin transfeksiyonu yoluyla motor nöronlar üretme prosedürünü göstermektedir.

Bu video, patojenik Leptospira'da CRISPR girişim tabanlı bir gen susturmayı göstermektedir. mRNA oluşumunu bloke eden bir CRISPR/Cas sistemi kullanılarak gen ekspresyonunun hedefli baskılanması, patolojik ve farmakolojik çalışmalar için aday genlerin belirlenmesine yardımcı olur.

Bu video, bir fare modelinde intraperitoneal tamoksifen enjeksiyonunu takiben tamoksifen ile indüklenebilen bir Cre-rekombinaz sistemi kullanılarak hedef gen nakavt prosedürü açıklanmaktadır.

Bu videoda, kültürlenmiş fare bağırsak organoid hücrelerinde birden fazla geni aynı anda devre dışı bırakmak için bir CRISPR birleştirici kullanan bir gen nakavt tekniği açıklanmaktadır. Bu yöntem, hastalıklı bir geni devre dışı bırakmak ve bir genin ve paraloglarının işlevini aydınlatmak için kullanılır.

Bu videoda, ölümsüzleştirilmiş hematopoietik kök ve progenitör hücrelerde (iHSPC'ler) stabil knockdown hücre hatları elde etmek için shRNA lentiviral vektörlerinin transdüksiyonunu gerçekleştirmek için bir yöntem gösteriyoruz.

Bu video, bir fare modelinde tetrasiklin veya Tet-On gen ekspresyon sistemini göstermektedir. Bir tetrasiklin türevi olan doksisiklin varlığında, ters tetrasiklin kontrollü transaktivatör proteinden oluşan Tet-On sistemi aktive olur ve ilgilenilen geni eksprese eder.

Bu videoda, bir hedef proteinin ekspresyonunu modüle etmek için siRNA'nın adipositlere ters transfeksiyonunu gerçekleştirmek için bir prosedürü açıklıyoruz.

Bu video, ilgilenilen bir gen ve düzenleyici bir plazmid içeren bir plazmit ile transfeksiyon yoluyla kültürlenmiş hücrelerde gen ekspresyonunu düzenleme yöntemini açıklar. Bu plazmitin ekspresyonu, tetrasiklin veya sentetik analogları tarafından kontrol edilebilir, bu da bu sistemi düzenlenebilir gen ekspresyonunu incelemek için yararlı bir model haline getirir.

Bu video, mağara balığının tek hücreli aşamasında mikroenjekte edilen translasyonel bloke edici morfolinoları kullanan bir gen yıkım tekniğini açıklamaktadır. Morfolinolar, hedef mRNA'nın tamamlayıcı dizisine bağlanan ve bir proteine translasyonunu bloke eden DNA oligonükleotidleridir. Sonuç olarak, morfolinolar, bir genin ekspresyonunu geçici olarak durdurmak veya azaltmak için moleküler araçlar olarak kullanılır.