Arabidopsis Bitkilerinde İkili Bakteriyel Yapay Kromozom Vektör Tabanlı Gen Dönüşümü: Tek Kopya Yerleştirme ile Transgenik Bitkiler Oluşturma Tekniği

Abstract

Kaynak: Tark-Dame, M., et al. BIBAC-GW İkili Vektör Kullanarak Tek Kopyalı Eklemelerle Transgenik Bitkiler Oluşturma. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, Agrobacterium aracılı ikili bakteriyel yapay kromozom tabanlı gen dönüşümü yoluyla kararlı transgen ifade eden transgenik Arabidopsis bitkilerinin neslini gösteriyoruz.

Protocol

1. Arabidopsis (Arabidopsis) Dönüşüm

1. Arabidopsis bitkilerini dönüşüm için hazırlayın.
   1. Arabidopsis bitkilerini çiçek açana kadar bir serada veya iklim kontrollü büyüme odasında büyütün (daldırma başına her biri 9 bitki içeren 12 saksı).
   2. Daha fazla ikincil cıvatanın ortaya çıkmasına izin vermek için ilk cıvataları klipsleyin. Bitkiler, kırpıldıktan 4-6 gün sonra, bitkilerin çok sayıda olgunlaşmamış çiçek başına sahip olduğu ve çok fazla döllenmiş silisiğe sahip olmadığı zaman daldırmaya hazırdır.
2. Çiçek daldırma
   1. Çiçek salkımlarını, ikili bakteriyel yapay kr....

Results

Şekil 1: Glufosinat-amonyum işleminden önce ve sonra Arabidopsis fideleri ile doldurulmuş tepsi. pBIBAC-BAR-GW T-DNA'da bulunan bar genini ifade etmeyen fideler, Glufosinat-amonyum çözeltisi püskürtüldükten sonra ölür. Fotoğraflar, (A) Glufosinat-amonyum ile püskürtülmeden önce, ekimden 14 gün sonra ve (B) 10 gün sonra, iki kez püskürtüldükten sonra aynı fide tepsisini göstermektedir.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Kanamisin sülfat monohidrat	Duchefa	K0126
Ağ geçidi LR klonaz enzim karışımı	Thermo Scientific - Canlandırıcı	11791-019
Murashige Skoog orta	Duchefa	M0221
Ağar	Bd	214010
Glufosinat-amonyum (Basta)	Bayer	79391781
Fosfor görüntüleyici	GE Sağlık Yaşam Bilimleri	Tayfun FLA 7000
streç film (Saran sargı)	Omnilabo (Omnilabo Belediyesi)	1090681
agaroz	Thermo Scientific - Canlandırıcı	16500