Morfolino Aracılı Gen Düzenleme: Tek Hücreli Mağara Balığı Yumurtalarında Translasyonel Bloke Edici Morpholino Oligonükleotidleri Kullanan Bir Gen Yıkma Tekniği

Özet

Kaynak: Stahl, BA ve diğerleri, Meksika Mağara Balıklarında Gen Fonksiyonunun Manipülasyonu. J. Vis. Exp. (2019).

Bu video, mağara balığının tek hücreli aşamasında mikroenjekte edilen translasyonel bloke edici morfolinoları kullanan bir gen yıkım tekniğini açıklamaktadır. Morfolinolar, hedef mRNA'nın tamamlayıcı dizisine bağlanan ve bir proteine translasyonunu bloke eden DNA oligonükleotidleridir. Sonuç olarak, morfolinolar, bir genin ekspresyonunu geçici olarak durdurmak veya azaltmak için moleküler araçlar olarak kullanılır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Morpholino oligo tasarımı

>NOT: A. mexicanus için diziler, Ulusal Biyoteknoloji Bilgi Merkezi (NCBI) Geni ve NCBI SRA (https://www.ncbi.nlm.nih.gov) aracılığıyla ve ayrıca Ensembl genom tarayıcısından (https://www.ensembl.org) edinilebilir. Hem yüzeyde hem de mağarada yaşayan formlarda kullanılmak üzere bir morfolino tasarlarken, bu aşamada morflar arasındaki herhangi bir genetik varyasyonu tanımlamak çok önemlidir, bu nedenle....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Balık yetiştiriciliği ve yumurta malzemeleri
İnce gözenekli balık ağı	Penn Plax (İngilizce)	BN4
Balık tankı ısıtıcısı	Akarsu	100106108
Yumurta tuzakları	Özel yapım	Na	Yumurtaları korumak için tankın dibine yerleştirmek için plastik ızgara tasarlayın ve oluşturun
Cam pipetler	Balıkçı Bilimsel	13-678-20C
Pipet ampulleri	Balıkçı Bilimsel	03-448-21
agaroz	Balıkçı Bilimsel	BP160-500
Yumurta kalıpları	Uyarlanabilir Bilim Araçları	TU-1
Morpholino malzemeleri
Morpholino'yu kontrol edin	Gen Araçları, LLC	Standart kontrol olio
Özel Morpholino	Gen Araçları, LLC	Na
Fenol Kırmızısı	Sigma Aldrich	P0290-100ML
Mikroenjeksiyon malzemeleri
Cam Kılcal Borular	Sutter Aletleri	BF100-58-10
Pipet çektirme	Sutter Aletleri	P-97
Pikoenjektör	Warner Enstrümanları	PLI-100A Serisi
Mikromanipülatör	Dünya Hassas Aletler	M3301R Serisi
Mikromanipülatör	Stand Dünyası Hassas Aletler	M10
Mimanipülatör Tabanı	Dünya Hassas Aletler	Çelik Levha Tabanı, 10 lbs

Serisi Serisi · Serisi Uçağı Serisi