Larva Temas Testi: Test Larvisidal Bileşiği ile Doğrudan Teması Takiben Sivrisinek Larva Ölümünü Değerlendirme Prosedürü

Özet

Kaynak: Brito-Sierra, C. A., et al. Yeni Böcek Öldürücü Kimyasalların Sivrisineklere Toksisitesini Test Etme Protokolleri J. Vis. Exp. (2019)

Bu videoda, çeşitli insan bulaşıcı hastalıklarının bilinen vektörleri olan sivrisineklerin üçüncü instar evre larvaları üzerindeki dopamin reseptör antagonisti amitriptilinin toksisitesini değerlendirmek için larva temas testini açıklıyoruz. Farklı zaman aralıklarında farklı amitriptilin konsantrasyonları ile inkübasyon üzerine larva mortalitesinin değerlendirilmesi, öldürücü konsantrasyonunun 50 belirlenmesine yardımcı olur.

Protokol

1. Larva Temas Testi (Tek Nokta Dozu veya Doz Yanıt Testi)

NOT: Test, test kuyucuklarındaki nihai DMSO konsantrasyonunun %1'i geçmemesi koşuluyla, suda veya dimetil sülfoksitte (DMSO) çözünür olan kimyasallarla gerçekleştirilebilir. Alternatif çözücüler bir seçenek olabilir, ancak öncelikle nihai konsantrasyonun maruziyetten 72 saat sonra %10'dan fazla mortaliteye neden olmadığını doğrulamak önemlidir. Test, tek noktalı bir doz veya doz-yanıt testi olarak gerçekleştirilebilir. İkincisi gerçekleştiriliyorsa, beklenen LC_50'yi kapsayan bir konsantrasyon aralığının (en az beş) test edilmesi önerilir.

1. Şeff....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Böcek ilacına duyarlı sivrisinek suşları	Sıtma Araştırma ve Reaktif Referans Deposu		https://www.beiresources.org/MR4Home.aspx; Önerilen suşlar: Aedes aegypti Liverpool (LVP) suşu, Anopheles gambiae Kisumu (KISUMU1) suşu ve Culex quinquefasciatus Johannesburg (JHB) suşu
aseton	Mallinckrodt Kimyasal	CAS 67-64-1	Seyreltme ve kontrol için kullanın
Amitraz	Sigma-Aldrich	CAS 33089-61-1	DMSO'da seyreltme gerektirir
Amitriptilin	Sigma-Aldrich	CAS: 549-18-8	Aseton içinde seyreltilebilir
Cis-(Z)-flupenthixol	Sigma-Aldrich	Ürün Kodu: 51529-01-2	Farmakolojik olarak dop benzeri reseptörlerin bozucu olarak test edilmiştir
Dimetilsülfoksit (DMSO)	Sigma-Aldrich	MKBF2985	Amitrazı çözmek için kullanılan organik çözücü
Kapaklı 24 oyuklu hücre kültürü plakası	Corning Anonim Şirketi	3526
Transfer pipetleri	Balıkçı Bilimsel	13-711-7 milyon	Larvaları sıralamak için kullanılır
Stereo mikroskop	Olympus	SZ6045	Larva tahlillerini puanlamak ve mikro uygulamalar yapmak için kullanılır

Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Serisi