$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Yetişkin Kan Besleme Testi (Tek Nokta Dozu veya Doz-Yanıt Testi)
- Yaklaşık 150, 4-5 günlük yetişkin dişi sivrisinekleri toplayın ve ayrı bir kafese aktarın. Bir doz-yanıt testi yapıyorsanız 6 kafes elde etmek için tekrarlayın. Besleme tahlilinden 1-24 saat önce şeker kaynağını çıkarın.
- Kimyanın saflığını hesaba katarak (tipik bir stok çözeltisi su veya tuz tamponunda 80 mM'dir) yukarıda tarif edildiği gibi bir stok kimyasal çözelti hazırlayın ve ardından gerektiği gibi su/tampon içinde seri seyreltmeler hazırlayın.
- İstenen test konsantrasyonunu elde etmek için 960 μL defibrinasyonlu tavşan kanına seyreltmelerin her birinden 40 μL ekleyin. Bir besleme ünitesine membran film uygulayın ve lastik bir halka ile kapatın. 1 mL kanı pipet ile aktarın ve besleme ünitesini bir ısıtma ünitesine takın.
- Membran yüzeyini taze yapılmış% 10 laktik asit çözeltisi ile nazikçe temizleyin ve besleme ünitesini yetişkin sivrisineklerin kafesine yerleştirin. Kafesi koyu renkli bir bez veya siyah çöp torbası ile örtün ve sivrisineklerin bir saat boyunca beslenmesine izin verin.
- Test çözeltilerinin geri kalanı ve negatif (sadece kan) kontrol için 1.2 - 1.4 arasındaki adımları tekrarlayın.
- Beslemenin tamamlanmasının ardından, sivrisinekleri uyuşturmak için kovaları 4 °C'de 5 dakika buzdolabında bekletin. Erkek sivrisinekleri ve beslenmemiş dişi sivrisinekleri çıkarın ve karın muayenesi ile beslenen ve kısmen beslenen sivrisineklerin toplam sayısını sayın ve kaydedin.
- Doz başına en az 50 kanla beslenen sivrisinek hedefleyerek kısmen ve tamamen beslenen dişi sivrisinekleri koruyun.
- Kovaları 28 °C ve %75 - 85 bağıl nem sabit koşulları altında plastik bir küvete veya büyütme odasına aktarın (12 saatlik gündüz/12 saatlik gece döngüsünde tercih edilir).
- Skor sayfasını kullanarak toplam ölü / yanıt vermeyen sivrisinek sayısını 0,5, 1, 1,5, 2, 24, 48 ve 72 saat (veya istediğiniz gibi alternatif zaman noktaları) olarak kaydedin (Tablo 1).
- Kan beslemesinden sonraki üçüncü günde, kafese bir yumurta kabı yerleştirin ve 72 saatlik bir süre boyunca yumurtaları toplayın. Diseksiyon mikroskobu altında tedavi başına üretilen toplam yumurta sayısını sayın.
- Her tedavi grubu ve kontrol için beslenen toplam sivrisinek sayısının bir fonksiyonu olarak yüzde mortalite ve doğurganlığı hesaplayın. İstenirse değiştirilmiş Abbott formülünü kullanarak kontrol mortalitesini düzeltin.
- Toksisite ve doğurganlık verilerini, tercih ettiğiniz yazılımı kullanarak bir histogram grafiği veya üstel eğri (bir doz-yanıt testi gerçekleştiriliyorsa) olarak görüntüleyin. Bir doz-yanıt testi yapılıyorsa, kontrole göre test kimyası için LD50, LD75 veya LD90 değerini hesaplayın.
- N = 3 veya daha fazla biyolojik kopya elde etmek için ayrı sivrisinek grupları kullanarak testi en az iki kez tekrarlayın.
Tablo 1. Yetişkin kanla besleme testinden elde edilen verileri kaydetmek için kullanılan örnek puan tablosu.Amitriptilin gibi küçük molekül antagonist kimyalarını test etmek için kullanılan tipik dozlar 50 μM, 100 μM, 200 μM ve 400 μM'dir.
| Sivrisinek Yetişkin (3-5 günlük) Topikal Test |
| Başlama tarihi: |
| Araştırmacı: |
| Türler/Tür: |
| Test Tipi: Tek nokta doz/doz-yanıt |
| A. Ölüm oranı (No. ölü sivrisinek) |
| Zaman (saat) | Doz 1 | 2. Doz | Doz 3 | 4. Doz | Doz 5 | kontrol |
| 0,5 | | | | | | |
| 1 | | | | | | |
| 1.5 | | | | | | |
| 2 | | | | | | |
| 2,5 | | | | | | |
| >B. Yüzde Ölüm |
| Zaman (saat) | Doz 1 | 2. Doz | Doz 3 | 4. Doz | Doz 5 | kontrol |
| 0,5 | | | | | | |
| 1 | | | | | | |
| 1.5 | | | | | | |
| 2 | | | | | | |
| 2,5 | | | | | | |