Türbidimetrik Limulus Amiposit Lizat Testi: Nano Formüllü İlaçlarda Endotoksin Kontaminasyonunu Tespit Etmek ve Ölçmek İçin Bir Teknik

Abstract

Kaynak: Neun, BW ve diğerleri, Limulus Amiposit Lizat (LAL) Tahlilleri Kullanılarak Nano Formülasyonlarda Endotoksin Tespiti. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, PEGile lipozomal doksorubisin nano formülasyonlarında endotoksin kontaminasyonunu tahmin etmek için Limulus amoebosit lizat veya LAL testinin türbidimetrik formatını açıklar. Endotoksinin LAL reaktifi ile reaksiyonunu takiben çözeltinin bulanıklığı, numunedeki endotoksinin tahmin edilmesine yardımcı olur.

Protocol

1. Nanopartikül Numunelerinin Hazırlanması

1. Çalışma örneğini LAL dereceli suda hazırlayın.
2. Numune pH'ı 6-8 aralığının dışındaysa, pirojen içermeyen sodyum hidroksit veya hidroklorik asit kullanarak pH'ı ayarlayın.
3. LAL dereceli su kullanarak, çalışma örneğinin birkaç seyreltmesini hazırlayın. En yüksek seyreltmenin maksimum geçerli seyreltmeyi (MVD) aşmadığından emin olun.

2. LAL Formatları Arasında Ortak Reaktiflerin Hazırlanması

1. 0.1 N konsantrasyonda bir çalışma çözeltisi hazırlamak için konsantre sodyum hidroksit stoğunu pirojen içermeyen LAL reaktif suyu kullanarak seyreltin.
2. Ko....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sodyum Hidroksit	Sigma	S2770 Serisi	Gerektiğinde, numune pH'ını 6-8 arasında olacak şekilde ayarlamak için kullanılır
hidroklorik asit	Sigma	H9892	Gerektiğinde, numune pH'ını 6-8 arasında olacak şekilde ayarlamak için kullanılır
LAL Reaktifi	Cape Cod'un Ortakları	T0051	Bu reaktif sadece bulanıklık testi ile kullanılabilir
Kontrol Endotoksin Standardı	Cape Cod'un Ortakları	E0005	Bu reaktif, bulanıklık ve jel-pıhtı tahlilleri ile kullanılabilir
LAL sınıfı su	Cape Cod'un Ortakları	WP0501	Bu reaktif herhangi bir LAL formatı ile kullanılabilir
Glucashield Tamponu	Cape Cod'un Ortakları	GB051-25	Beta-glukanlardan yanlış pozitif yanıtı önlemek için kullanılır
Tek kullanımlık endotoksin içermeyen cam seyreltme tüpleri 12 x 75 mm	Cape Cod'un Ortakları	TB240	Bu tüpler her üç tahlil ile de kullanılabilir
Tek kullanımlık endotoksin içermeyen cam reaksiyon tüpleri 8 x 75 mm	Cape Cod'un Ortakları	TK100	Bu tüpler bulanıklık ve kromojenik tahlillerle birlikte kullanılabilir
0,25 ve 1,0 mL hacimli pirojen içermeyen uçlar	YAĞMUR SUYU	PPT25, PPT10	Uçlar ve pipetler endotoksini adsorbe edebilir ve LAL testine müdahale eden sızabilir maddeleri serbest bırakabilir. Bu RAININ uçları, LAL tahlilindeki optimum performansları doğrulandığı ve onaylandığı için kullanılır
Pirojen içermeyen mikrosantrifüj tüpleri, 2.0 mL	Eppendorf Belediyesi	22600044	Diğer eşdeğer malzemeler kullanılabilir
Pirojen ücreti kombiuçları, 5 mL	Eppendorf Belediyesi	30089669	Diğer eşdeğer malzemeler kullanılabilir
Pipetleyiciyi tekrarlayın	Eppendorf Belediyesi	4982000020	Diğer eşdeğer malzemeler kullanılabilir
Mikrosetrifüj	herhangi bir marka		Herhangi bir marka kullanılabilir
Buzdolabı, 2-8 C	herhangi bir marka		Herhangi bir marka kullanılabilir
girdap	herhangi bir marka		Herhangi bir marka kullanılabilir
Derin dondurucu, -20 C	herhangi bir marka		Herhangi bir marka kullanılabilir
Pyros Kinetix veya Pyros Kinetix Flex okuyucu	Cape Cod'un Ortakları	PKF96	Diğer enstrümanlar da kullanılabilir. Bununla birlikte, bu testte kullanılan LAL reaktifleri ve endotoksin standartları optimizasyon gerektirebilir. Başka bir enstrümantasyon kullanıldığında, talimatlar için lütfen cihaza ve LAL kiti üreticilerine bakın