Diferansiyel Nükleer Boyama Deneyi: Promidyum İyodür ve Hoechst Çift Boyama ile Mitokan Sitotoksisitesini Belirlemek İçin Bir Test

Özet

Kaynak: Pei, J. et al., Mitocan sitotoksisitesinin doğru belirlenmesi için Otomatik Diferansiyel Nükleer Boyama Testi. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu video, mitokanın ilaca duyarlı kanser hücreleri ve sağlıklı varyantlar üzerindeki sitotoksik etkisini tespit etmek için bir nükleer boyama yöntemini göstermektedir. Promidyum iyodür ve Hoechst boyası gibi DNA bağlayıcı boyalarla yapılan çift boyama, ölü ve canlı hücreler arasında net bir ayrım sağlar, böylece ilacın sitotoksisitesinin değerlendirilmesine yardımcı olur.

Protokol

1. Sitotoksisite Testi: Kurulum

1. Uygun ortamda (serumsuz veya% 1, 2.5 veya% 5 FBS RPMI-1640) istenen konsantrasyonlarda ilgilenilen bileşiklerin çözeltilerini hazırlayın.
   1. Tek bir bileşiğin sitotoksisitesini ölçmek için (ör., etkili dozları belirlemek için), bileşikleri 2x nihai konsantrasyonda hazırlayın.
   2. Bileşik kombinasyonlarının sitotoksisitesini ölçmek için, bileşikleri 4x nihai konsantrasyonda hazırlayın.
   3. Aynı miktarda çözücüyü uygun ortamla karıştırarak yalnızca çözücü kontrolleri hazırlayın. Örneğin, DMSO ve metanol içinde çözünmüş bileşikleri test ediyorsanız, her çözücü için yalnızca çözücü kontrolü yapın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
2-Deoksi-D-glikoz / 2-DG	Kimya-İmpeks	50-519-067
3-bromo-piruvat	Alfa Aesar	1113-59-3
96 kuyulu plakalar	Greiner Bio-Bir	655090	Siyah veya şeffaf düz tabanlı 96 oyuklu plakalar
Kontes II otomatik hücre sayacı	Termo Balıkçı
Cytation 5 Hücreli Görüntüleme Çok Modlu Okuyucu	BioTek
Hoechst 33342	Termo Balıkçı	62249	20 mM çözelti; son konsantrasyon 1:1.000
HyClone fetal sığır serumu	GE Sağlık	# 25-514
m-klorofenilhidrazon / CCCP	Sigma Aldrich	C2759
PBS tabletleri	Termo Balıkçı	BP2944100	1 tablet + 200 mL steril su = 1x PBS çözeltisi
Penisilin-Streptomisin-Glutamin (100X)	Gibco (Gibco)	10378016
Propidyum İyodür	Termo Balıkçı	50-596-072	Kuru toz; PBS'de 1 mg / mL stok; son konsantrasyon 5 μg / mL (lösemi hücreleri), 1 μg / mL (normal PBMC'ler)
Rotenon	Ark Ecz	AK115691
RPMI-1640 Ortamı L-glutamin ve sodyum bikarbonatlı, sıvı, steril filtreli, hücre kültürüne uygun	Sigma Aldrich	R8758-500ML
Tripan mavisi lekesi (% 0.4)	Gibco (Gibco)	15250-061
Hücre hatları
K562	ATCC (Uzay Servisi)	CCL-243	KML hücre hattı
MOLM-13	ATCC (Uzay Servisi)		AML hücre hattı
KÖSTEBEK-4	ATCC (Uzay Servisi)	CRL-1582	TÜM hücre hattı
OCI-AML2	ATCC (Uzay Servisi)		AML hücre hattı

Teknolojisi · Serisi . · Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi