İnsanlaştırılmış Mediatör Enzim Salınım Testi: İn Vitro Bazofil Degranülasyon Yanıtını İzleyerek Test Antijeninin Alerjik Potansiyelini Taramak İçin İmmünokimyasal Bir Yöntem

Abstract

Kaynak: Wenger, M. et al. Alerjen potensi için bir okuma olarak insanlaştırılmış arabulucu serbest bırakma testi. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu videoda, bazofil degranülasyonunu indüklemek için bir antijenin alerjik potansiyelini değerlendirmek için bir in vitro yöntemi açıklıyoruz. β-hekzosaminidaz, kimyasal aracı salınımının bir indeksi olarak kullanılır ve β-heksosaminidazın enzim aktivitesi, florojenik bir substrat kullanılarak ölçülür.

Protocol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir

1. huRBL hücrelerinin pasif duyarlılığı

1. Önceden inkübe edilmiş Ag8 / serum süspansiyonunu 250 x g'da 5 dakika santrifüjleyin.
2. Santrifüjlenmiş Ag8 / serum süspansiyonunun 50 μL'sini, Ag8 hücre peletini bozmadan her bir kuyucuk içeren huRBL hücrelerine aktarın.
   1. Hassaslaştırılmış, ancak uyarılmamış hücreler (antijen eklemeyin) olan antijen kontrolü yok, alt sinyal platosu / arka planı için bir gösterg....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
4-Metilumbelliferil N-asetil-β-D-glukozaminid	Sigma	M2133
huRBL hücreleri için 96 oyuklu plaka (Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Deltatreated, düz tabanlı mikroplaka)	ThermoFisher Bilimsel	167008
Substrat çözeltisi ve hücre süpernatantı için 96 oyuklu plaka (Greiner BioOne işlenmemiş 96 oyuklu mikroplakalar)	Balıkçı Bilimsel	655101
Sığır serum albümini (BSA)	Sigma	10735078001
Sitrik asit	Uygulama	131018
glisin	Uygulama	A3707
Sodyum klorür (NaCl)	Uygulama	A2942
Sodyum hidrojen karbonat (NaHCO3)	Uygulama	131638
Triton X-100	Sigma	X100
Tyrode'un tuzu	Sigma	T2145