Yöntem makalesi

Bioreporter Testi: SARS-CoV-2 Antikorlarını Tespit Etmek için Biyolüminesan Raportör Sistemi Kullanan Hassas Bir Teknik

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Rezaei, R. ve diğerleri, HiBiT Tabanlı Biyomuhabir Kullanarak SARS-CoV-2 Reseptör Bağlayıcı Alan Antikorunun Tespiti. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu videoda, SARS-CoV-2 nötralize edici antikorları tespit etmek için HiBit-RBD bioreporter sistem tabanlı testi gösteriyoruz. Bu sistem, RBD alanına kaynaşmış HiBiT içeren bir biyolüminesan raportör sistemi kullanarak viral RBD alanını hedefler.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hızlı ve hassas bir tahlil ile anti-RBD antikorunu tespit etme

  1. HiBiT-RBD antikor tespit testi
    1. HiBiT-RBD bioreporter.
      hazırlayın not: Süpernatantın bir sonraki tahlil için kullanılması tavsiye edilir, çünkü toplanması daha kolaydır ve proteinin olgun glikosile edilmiş versiyonunu içerir. Ayrıca, lizat, HiBiT-RBD-antikor etkileşimine müdahale edebilecek birkaç başka proteine sahiptir.
    2. 50 μL HiBiT-RBD içeren süpernatanı 1,5 mL'lik bir mikrotüpte 1 μg ticari SARS-CoV-2-RBD antikoru ile birleştirin. Çözeltiye 20 μL immünoglobulin bağlayıcı protein (protein G) ekleyin. PBS.
      ekleyerek toplam hacmi 300 μL'ye getirin not: Karışımın toplam hacmi 150 μL'ye düşürülebilir. Daha düşük toplam hacimler, antikorların biyomuhabir ile yetersiz karıştırılmasına neden olabileceğinden önerilmez.
    3. Tüpleri bir tüp çalkalayıcı veya döndürücü üzerinde 30 dakika inkübe edin. 30 saniye boyunca 12.000 x g'da santrifüjleyin, süpernatanı atın ve PBS ile yıkayın. Serbest HiBiT-RBD'yi çıkarmak için işlemi üç kez tekrarlayın. 50 μL PBS'de yeniden süspanse edin ve 96 oyuklu bir plakaya aktarın.
    4. 50 μL 1x LgBiT ekleyin ve 5 dakika bekleyin. Ardından, 50 μL 1x NanoLuc substrat ekleyin. Lüminesan sinyali hemen bir luminometre ile okuyun.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Bio-Plex El Tipi Manyetik YıkayıcıBiyo-Rad171020100aygıt
Dual-Glo lusiferaz Test SistemiPromegaE2940100 mL kit
LgBiTPromegaN3030Tahlil kiti
Pierce Protein G Manyetik BoncuklarThermo Fisher Bilimsel88848Tahlil
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Nötralize Edici Antikor, Fare MabÇinBiyolojik40592-MM57Tahlil
Synergy Mx Mikroplaka OkuyucuBioTek96 kuyulu plaka okuyucu luminometre
Fuar Serisi Fuar Serisi Teknolojisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

HiBiT RBD SistemiBiyol minesans TespitRBD Ba lanmasProtein G BoncuklarLgBiT SubstratFurimazin OksidasyonuL minometre l mN tralizan Antikorlar

İlgili makaleler