Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Fagositoz Testi: Drosophila melanogaster'in Embriyonik Hücrelerinde Apoptotik Hücre Yutulmasını Görselleştirmek İçin Bir İmmün Boyama Tekniği

1.1K görüntüleme

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

Kaynak: Nonaka, S. et al. Drosophila embriyolarında apoptotik hücreler için fagositoz testi. J. Vis. Uzm. (2017).

Bu video, Drosophila melanogaster'in homojenize embriyonik hücrelerinde apoptotik hücre yutulmasını görselleştirmek için bir immün boyama tekniğini göstermektedir. Bu yöntem, apoptotik hücre yutulmasının derecesini belirleyerek hücresel fizyoloji hakkında bilgi sağlar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Hemositlerin Boyanması

  1. Anti-Croquemort antikoru ile immün boyama
    1. Cam slaytları seri olarak 10 dakika metanol içinde, %0,2 (h/h) Triton X-100 içeren PBS'de 10 dakika ve ardından PBS'de 10 dakika bekletin.
    2. Bloke etmek için hücrelere% 0.2 (h / h) Triton X-100 içeren PBS'ye 20 μL% 5 (h / v) tam domuz serumu monte edin. Slaytları oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edin.
    3. Çözeltiyi cam slaytlardan çıkarın ve hücrelere% 0.2 (h / h) Triton X-100 içeren PBS'y....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
bütün domuz serumuMP Biyomedikal55993Engellemek için
Kpl Anti-Sıçan IgG (H + L) Ab MSA, APKPL (Türkçe)475-1612bir anti-Croquemort antikoru ile lekelenmiş hemositler için ikincil antikor
5-bromo-4-kloro-3-indolil-fosfatRoche11383221001BCIP, Hemositlerin boyanması için
nitro mavisi tetrazolyumRoche11383213001NBT, Hemositlerin boyanması için
Anti-Croquemort antikorudaha önce Manaka ve diğerleri, J. Biol. Chem., 279, 48466-48476
Apop Tag Peroksidaz Yerinde Apoptoz Tespit KitiKırlangıçS7100 SerisiApoptoitc hücrelerinin boyanması için. Bu kit, Dengeleme tamponu, Reaksiyon tamponu, STOP/Wash tamponu, TdT enzimi ve Anti-Digoksigenin-Peroksidaz içerir.
3,3'-diaminobenzidin tetrahidriklorürNacalai Tesque11009-41DAB, Apoptoitk hücrelerinin boyanması için

Etiketler

Drosophila EmbriyolarCroquemort Resept rAlkalen FosfatazTdT EnzimiI k MikroskobuHemosit Gran lleriDNA Fragmantasyonu