Balık Embriyolarında PM2.5 Aracılı DNA Hasarını Tespit Etmek için İmmünofloresan Testi

Özet

Kaynak: Huang, Y., et al. Zebra Balığı Embriyo Kalplerinde PM_2.5 ile İndüklenen DNA Hasarını Tespit Etmek için İmmünofloresan Kullanma. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu video, sırasıyla DNA hasarını ve çift sarmallı DNA kırılmalarını gösteren 8-OHdG ve γH2AX seviyelerini ölçerek zebra balığı embriyolarının kalplerinde PM_2.5'in neden olduğu oksidatif hasarı tespit etmek için oldukça hassas bir immünofloresan tabanlı testi göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. PM_2.5 örnekleme ve organik bileşik ekstraksiyonu

NOT: PM_2.5, daha önce açıklandığı gibi 1-7 Ağustos 2015 tarihleri arasında Çin'in Suzhou kentindeki bir kentsel alanda toplanmıştır.

1. Organik bileşenleri çıkarmak için 47 mm kuvars membran filtrelerini 500 °C kül fırınında 2 saat pişirin.
2. 24 saat kesintisiz örnekleme için PM_2.5 örnekleyiciye bir filtre yerleştirin.
3. Filtreyi çıkarın ve oda....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
8-OHdG Antikoru	Santa Cruz Biyoteknoloji, ABD	SC-66036	Birincil antikor
Analitik terazi	Sartorius, Çin	BSA124S
Bsa	Solarbio, Pekin, Çin	SW3015	Engellemek için
DAPI (DAPI	Abcam, Amerika Birleşik Devletleri	AB104139	Nükleer karşı leke için.
DMSO (Türkçe)	Solarbio, Pekin, Çin	D8371
Floresan mikroskobu	Olimpos, Japonya	IX73	Floresan sinyallerini görüntülemek için
Keçi Anti-Tavşan IgG Cy3	Carlsbad, Amerika Birleşik Devletleri	CW0159	İkincil antikor
Keçi Anti-Tavşan IgG FITC	Carlsbad, Amerika Birleşik Devletleri	RS0003	İkincil antikor
N-Asetil-L-sistein (NAC)	Adamas-Beta, Şangay, Çin	616-91-1
Yörünge çalkalayıcı	QILINBEIER, Çin	TS-1
Paraformaldehit	Sigma, Çin	P6148 Serisi	Fiksasyon için% 4 paraformaldehit yapın.
Fosfat Tamponlu Tuzlu	HyClone, Amerika Birleşik Devletleri	SH30256.01	Yıkama için PBS'de% 0.1 Tween hazırlayın.
PM2.5 örnekleyici	TianHong, Wuhan, Çin	TH-150C	24 saat kesintisiz PM2.5 örneklemesi için.
Devridaim su ürünleri yetiştiriciliği sistemi	HaiSheng, Şangay, Çin		Zebra balığı içinde tutuldu.
Soxhlet çıkarıcı	ZhengQiao, Şangay, Çin	BSXT-02	Organik bileşenlerin ekstraksiyonu için.
Stereomikroskop	Nikon, Kanada	SMZ645	Zebra balığı embriyolarından kalp diseeksiyonu için.
Trikain metansülfonat (MS222)	Sigma, Çin	E10521	Zebra balığı embriyolarını uyuşturmak için
Ara 20	Sigma, Çin	P1379 Serisi
γH2AX Antikoru	Abcam, Amerika Birleşik Devletleri	AB26350	Birincil antikor

Serisi Serisi ) (İngilizce) Serisi Serisi Serisi Serisi Tezli Yüksek Lisans Su Serisi Serisi Serisi Serisi