Amino Asitlerin Hücresel Alımını Ölçmek için Radyoaktif İşaretli Amino Asit Alım Testi

Özet

Kaynak: Shen, L., et al. Kültürlenmiş Kemik Hücrelerinde ve İzole Kemik Şaftlarında Amino Asit Tüketiminin Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2022).

Bu video, kemik iliğinden türetilmiş stromal hücreler tarafından amino asit alımını tahmin etmek için in vitro bir tekniği göstermektedir. Na⁺'ya bağımlı amino asit taşıyıcıları, hücrelerin içinde radyoaktif işaretli amino asitlerin alımına aracılık eder ve hücresel alım, radyoaktivite ölçülerek tahmin edilir.

Protokol

Radyoaktif maddelerin (RAM) kullanımı, her kurumda belirlenmiş bir güvenlik komitesinin önceden onayını gerektirir.

1. Hücrelerde amino asit alımı

1. Plaka: 5 x 10⁴ ST2 hücresi, 12 oyuklu bir doku kültürü plakasının her bir oyuğunda. %10 FBS, 100 U/mL penisilin ve 0.1 μg/mL streptomisin (Kalem/Strep) içeren α-MEM'deki plaka hücreleri. Adım 1.12'deki normalizasyonlar için koşul başına hücre sayısını ölçmek için fazladan hücre kuyuları oluşturun. Hücreleri, %5 CO₂ ile 37 ° C'de nemlendirilmiş bir hücre kültürü inkübatöründe inkübe edin.
2. Hücreleri birleşene kadar 2-3 gün kültürleyin.
3. Deney günü ....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
% 0.25 tripsin	Gibco (Gibco)	25200
12 oyuklu plaka	Corning	3513
Beckman LS6500 sintilasyon sayacı
Kalsiyum klorür	Sigma	C1016
kolin klorür	Sigma	C7077
D-(+)-Glikoz çözeltisi	Sigma	G8769
DPBS (DPBS)	Gibco (Gibco)	14190
HEPES(1M)	Gibco (Gibco)	15630
L-[3,4-3H(N)]-Glutamin	PerkinElmer	NET551250UC
Sıvı scintilasyon şişeleri	Sigma	Z190535
lityum klorür çözeltisi, 8M	Sigma	L7026
Magnezyum klorür	Sigma	M8266
MEMα	Gibco (Gibco)	12561
Mikrosantrifüj tüpü, 15 mL	Biyotix	89511-256
Potasyum klorür	Sigma	P3911 Serisi
Sodyum bikarbonat	Sigma	S6014 Serisi
sodyum klorür	Sigma	S9888 Serisi
Sodyum dodesil sülfat	Sigma	436143
Ultima Gold (Sintilasyon solüsyonu)	PerkinElmer	6013329
α- (Metilamino) izobütirik asit	Sigma	M2383

adet Adet Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi