Solucanların Hücresel Fraksiyonlarında Piruvat Seviyelerinin Tahmini için Piruvat Testi

Bu makalede

Özet

Kaynak: Yanase, S. et al. Nematod Caenorhabditis elegans'ta Hücre İçi Laktat ve Pirüvatın Küçük Ölçekli Kolorimetrik Testleri.J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, Caenorhabditis elegans'ın hücresel fraksiyonlarında piruvatın kantitatif olarak ölçülmesi için kolorimetrik bir test açıklanmaktadır. Piruvat oksidazın hücresel piruvat ile enzimatik reaksiyonundan üretilen hidrojen peroksit kullanılarak, piruvat konsantrasyonunu belirlemek için kolorimetri kullanılarak ölçülen renkli bir ürün üretmek için kromojenik bir boya oksitlenir.

Protokol

1. C. elegans'ın Senkronize Kültürü

Tohumlamadan önce, Escherichia coli (E. coli) suşu OP50'yi gece boyunca 37 ° C'de 300 mL Luria-Bertani (LB) suyu sıvı ortamında kültürleyin. Kültürlenmiş OP50'yi -4 °C'de saklayın.
1. LB suyunu sıvı ortam yapmak için 10 g tripton, 5 g maya özütü, 10 g NaCl ve 1.5 mL 1 N NaOH kullanın ve deiyonize su ile 1 L'ye ekleyin. Otoklav.
  not: OP50 ve C. elegans suşları, Caenorhabditis Genetik Merkezi'nden (Minnesota Üniversitesi, St. Paul, MN, ABD) temin edilebilir.
Nematod büyüme ortamı (NGM) agar yapmak için 3 g NaCl, 2.5 g pepton, 17 g....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1. Hücresel metabolitlerin ekstraksiyonu için işlem. (A) 1.500-3.000 solucan bir NGM agar plakasına (90 mm Petri kabı) yerleştirildi. Kolorimetrik tahliller için beş plaka üzerindeki solucanlardan ekstraksiyon yeterliydi. (B) Plaka başına 3.000 ve 1.500 solucandan oluşan beş plakadan toplanan solucanlar, panelin sırasıyla sol ve sağ tarafında belirtilmiştir. Her.......