Fitoöstrojen Östrojenik Aktiviteyi Taramak için Östrojen Reseptör-Raportör Aktivite Testi

Özet

Kaynak: Fender, E. et al., Hücre Bazlı Östrojen Reseptörü Kullanarak Fitoöstrojenlerin Taranması β Raportör Testi. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu videoda, bitki türevli bileşiklerin östrojenik aktivitesini belirlemek için hücre bazlı bir raportör testi açıklanmaktadır. Östrojen benzeri aktiviteye sahip bir bileşik, östrojen reseptörlerine bağlanmasını taklit eder ve aşağı akış raportör enzim gen transkripsiyonunu yönlendirir. Raportör enzim, bileşiğin östrojenik aktivitesini gösteren bir reaksiyonda biyolüminesans üretir.

Protokol

1. Transfeksiyon testi β insan östrojen reseptörü

NOT: Test protokolünün 1. günü için aseptik teknik ve laminer akış başlığı gereklidir.

1. Standart eğri için 17β-Estradiol dilüsyonları hazırlayın.
   1. Hücre Geri Kazanım Ortamını ve Bileşik Tarama Ortamını (CSM) dondurucu deposundan aktarın ve 37 °C'lik bir su banyosunda çözdürün.
   2. Mikrosantrifüj tüplerini Ara 1 ve 2 (INT1, INT2) ve 1-8 olarak etiketleyin.
   3. INT1'i 995 μL CSM ile, INT2'yi 615 μL CSM ile, tüp 1'i 900 μL CSM ile ve tüp 2-8'i 600 μL CSM ile doldurun. Tüp 8'i bir kenara koyun.
   4. 5 μL 100 μM 17β-Estradiol Stoğunu INT1....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1000 μL pipet
20 μL pipet
200 μL pipet
37 °C su banyosu
37 °C, nemlendirilmiş %5 CO2 inkübatörü
% 70 etanol
Analitik terazi
Hücre kültürü dereceli laminer akış başlığı
Dimetil sülfoksit
Tek kullanımlık medya havzası, steril
Damla filtrasyon sistemi
Erlenmeyer şişeleri			125 mL ve 250 mL
HPLC sınıfı metanol
İnsan ERβ Raportör Test Sistemi, 1 x 96 kuyucuklu format tahlilleri	İndigo Biyobilimler	IB00411	Tahlil kiti - 24 numuneyi ve standart eğriyi analiz eder
Liyofilizatör
Çok kanallı pipet
Yörünge çalkalayıcı
Plaka okuma luminometresi			eski Bioteck Sinerjisi HTX
Döner evaporatör
Yuvarlak tabanlı şişeler			50 mL ve 300 mL
Steril mikrosantrifüj tüpleri veya steril çok kanallı medya havuzları
Steril uçlar			200 μL ve 1000 μL
Whatman 1. sınıf kağıt
Whirl-pak çantalar			steril polietilen torbalar