Ligand ve Analit Arasındaki Etkileşimleri Tespit Etmek için Biyokatman İnterferometri Teknolojisi

Abstract

Kaynak: Desai, M., et al. Transkripsiyonda protein-protein etkileşimlerini incelemek için biyokatman interferometrisinin (BLI) uygulanması. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, ligandlar ve hedef analitler arasındaki moleküller arası etkileşimleri gerçek zamanlı olarak tespit etmek için biyokatman interferometrisi (BLI) teknolojisini gösteriyoruz. BLI, çözelti içindeki analitlerle etkileşime girerken bir biyosensör yüzeyi üzerindeki hareketsizleştirilmiş ligandlardan oluşan bir tabakadan yansıyan beyaz ışığın girişim modelindeki değişiklikleri ölçer.

Protocol

1. Biyosensör hidrasyonu ve tahlil kurulumu

1. BLItz makinesini açın.
2. Makinenin, makinenin arkasındaki bir USB veri çıkış bağlantı noktası aracılığıyla bilgisayara bağlı olduğundan emin olun.
3. Bilgisayarda, ilgili yazılımı açın (örneğin, BLItz Pro) ve ekranın sol tarafındaki Gelişmiş Kinetik'e tıklayın.
4. Yazılımda, deneyle ilgili tüm uygun bilgileri (Deney Adı, Açıklama, Numune Kimliği ve Protein Konsantrasyonu dahil) her bir başlığın altına yazın.
5. Biyosensör Tipi'ne tıklayın ve açılır menüden Ni-NTA'yı seçin.
   1. Çalıştırma Ayarları başlığı altın....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BLItz makinesi	ForteBio (Türkçe	45-5000	aygıt
Ni-NTA biyosensör tepsisini daldırın ve okuyun	ForteBio (Türkçe	18-5101	Poly-His etiketli Proteinler için kullanıma hazır Ni-NTA biyosensörler
Damla tutucu	ForteBio (Türkçe	45-5004	aygıt
PCR tüpleri (0,2 mL)	Thomas Bilimsel	CLS6571	Plastik eşya
Mikrosantrifüj tüpleri (siyah)	Thermo Fisher Bilimsel	03-391-166	Plastik eşya
Kimmendil	Thermo Fisher Bilimsel	06-666A	Plastik eşya
DTT (DTT)	Thermo Fisher Bilimsel	R0861	kimyasal
Edta	MilliporeSigma	E6758	kimyasal
MgCl2	MilliporeSigma	M8266	kimyasal
NaCl (Doğal)	MilliporeSigma	S9888 Serisi	kimyasal
Tris-HCl	Altın Biyografi	T095100	arabellek