BW Hücrelerinde Reseptör-Ligand Etkileşimini İncelemek için ELISA Tabanlı Raportör Testi

Özet

Kaynak: Elias, S. et al., Reseptör-Ligand Etkileşimlerini İncelemek için Bir BW Raportör Sistemi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, reseptör-ligand etkileşiminin raportör testine dayalı tespitini göstermektedir. Başarılı reseptör-ligand etkileşimi, aşağı akış sinyal yolunu aktive ederek, çözelti içinde salgı raportör molekülleri olarak sitokinlerin üretilmesine ve salınmasına neden olur, bu da ELISA kullanılarak doğrulanır.

Protokol

1. Kimerik Yapıyı İfade Eden Bir Plazmidin Üretilmesi

>NOT: Amaç, fare CD3ζ zincirinin transmembran ve hücre içi alanlarına kaynaşmış ilgilenilen reseptörün hücre dışı alanını ifade eden bir plazmit oluşturmaktır (Şekil 1A).

1. Sinyal peptidi de dahil olmak üzere ilgilenilen reseptörün hücre dışı alanının sırasını alın. Bu reseptörü eksprese etmesi beklenen DNA materyalini elde edin (örneğin, cDNA veya bir plazmit).
2. Fare CD3ζ zincirinin transmembranını ve hücre içi alanlarını ifade eden DNA materyali elde edin (örneğin, cDNA veya bir plazmit).
3. <....

Sonuçlar

Resim 1: Kimerik reseptör-CD3ζ'nin yapısı ve PCR primerlerinin tasarımı. (A) Fare CD'sinin transmembran ve hücre içi alanlarına kaynaşmış hücre dışı bir reseptörün genel yapısı3ζ. (B) Reseptörün hücre dışı alanı, CD3ζ nükleotidlerini de içeren bir 3' primer ile amplifiye edildi. (C) CD3ζ'nin hücre içi ve transmembran alanları, reseptör nükleotidlerini de içeren 5' primer ile amplifiye edildi. (D) Son .......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
AccuPrep, Plazmid Mini Ekstraksiyon Kiti	Biyonez	K-3030
Anti-fare IL-2	Biyo Efsane	503702
Biotin anti-fare IL-2	Biyo Efsane	503804
ELISA plakaları	Kökü Kaldır	60-655061
Fetal Sığır Serumu	Sigma	F7524-500ml
G418	Merkür	MBS3458105GM
Gen Darbesi II	Biyo-Rad	165-2105, 165-2106, 165-2107, 165-2108, 165-2109, 165-2110
L-Glutamin	Biyolojik endüstri	03-020-1B
MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler Çözeltisi	Biyolojik endüstri	01-340-1B
Penisilin-Streptomisin Çözeltisi	Biyolojik endüstri	03-031-1B
Peroksidaz streptavidin	Jackson İmmün Araştırma	016-030-084
PureLink HiPure Plazmid Filtre Maxiprep Kiti	ThermoFisher Bilimsel	K210016
RPMI-1640 Orta	Biyolojik endüstri	30-2001
Sodyum Pirüvat	Biyolojik endüstri	03-042-1B
TMB (Türkçe)	Güney Biothech	0410-01

Serisi Serisi